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J'utilise de la gélose nutritive tous les jours en laboratoire ; c'est l'un des milieux de culture les plus importants en bactériologie médicale. Dans cet article, nous discuterons de sa composition, de ses utilisations, de ses limites et de la manière de le préparer.
◉ Qu'est-ce que la gélose nutritive?
La gélose nutritive est un milieu à usage général adapté à la culture d'une grande variété de micro-organismes non exigeants.
Ce milieu nutritif, de composition relativement simplifiée, est utilisé pour repiquer des organismes à des fins d'entretien ou pour vérifier la pureté des repiquages et pour le dénombrement des organismes dans l'eau, les eaux usées, l'urine, les matières fécales et autres matières.
La gélose nutritive manque d'indicateurs, d'agents sélectifs, d'ingrédients différentiels et de substances enrichissantes. Par conséquent, il est utilisé pour une meilleure expression de la pigmentation, des tests biochimiques et même le sérotypage.
La formule de la gélose nutritive a été initialement publiée par l'American Public Health Association en 1917.
Gélose nutritive
◉ Composition de la gélose nutritive
◈ La composition de la gélose nutritive peut être ajustée pour obtenir des performances optimales:
- 0,5 % de peptone : fournit de l'azote organique.
- 0,3 % d'extrait de bœuf/extrait de levure : apporte des éléments hydrosolubles fournissant des vitamines, des glucides, de l'azote et des sels.
- 1,5 % Gélose bactériologique : confère de la solidité au mélange.
- 0,5 % de chlorure de sodium : ajuste les proportions du mélange pour qu'elles ressemblent à celles trouvées dans le cytoplasme de la plupart des organismes.
- Eau distillée : sert de moyen de transport pour les différentes substances contenues dans la gélose.
- pH ajusté à neutre (6,8) à 25 °C (77 °F).
Gélose nutritive déshydratée
◉ Préparation de gélose nutritive
◉ 1- Milieu déshydraté
- Suspendre 28,0 grammes dans 1 litre d'eau purifiée/distillée ou déminéralisée.
- Chauffer à ébullition pour dissoudre complètement le milieu.
- Stérilisez à l'autoclave à une pression de 15 lb (121 °C) pendant 15 minutes.
- Après l'autoclavage, laisser refroidir à 45-50 °C.
- Versez la gélose nutritive dans des boîtes de Pétri (jusqu'à ce que la gélose est solidifiée).
- Conservez les boîtes au réfrigérateur entre 2 et 8 °C.
◉ 2- Milieu préparé
Liquéfier la gélose (par exemple au bain-marie), la refroidir à 45-50°C et la verser dans des boîtes de Pétri. Laissez-le reposer pendant au moins 30 minutes.
Gélose nutritive préparée
Note : La gélose nutritive avec 0,8 % de NaCl et pH 6,0 est utilisée pour la culture de bactéries nécessitant des conditions légèrement acides. Les milieux nutritifs peuvent être utilisés comme milieux enrichis par l'ajout de 10 % de sang ou d'autres fluides biologiques tels que le liquide ascétique, le sérum, etc.
◉ A quoi sert la gélose nutritive ?
La gélose nutritive fournit les nutriments essentiels nécessaires à la croissance des bactéries, des levures et des moisissures. Voici quelques-unes des principales utilisations de la gélose nutritive :
- Culture de micro-organismes : fournit une surface solide pour la culture de bactéries, de levures et de moisissures.
- Culture d'urine : couramment utilisée en microbiologie clinique pour cultiver et identifier les micro-organismes présents dans les échantillons d'urine.
- Dénombrement des micro-organismes : peut être utilisé pour estimer le nombre de micro-organismes viables dans un échantillon donné.
- Paramètres éducatifs : est couramment utilisé dans les établissements d'enseignement pour enseigner les concepts de microbiologie.
- Utilisé dans les procédures de contrôle qualité.
- Stockage et transport à court terme des micro-organismes.
- Isolement et purification de la culture : l'ensemencement d'un échantillon sur la surface de la gélose permet la séparation et l'identification des colonies individuelles.
◉ Quelles bactéries se développent sur la gélose nutritive ?
La gélose nutritive contient un mélange équilibré de nutriments et manque de composants sélectifs, permettant la croissance d'une grande variété de bactéries, de levures et de moisissures. Voici quelques exemples de bactéries qui se développent couramment sur de la gélose nutritive :
- Bactéries à Gram positif : espèces de Staphylococcus (par exemple, Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus), espèces d'Enterococcus (enterococcus faecalis, enterococcus faecuim)
- Bactéries à Gram négatif : Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella, Proteus mirabilis etc. .
- Levure : espèce Candida.
Les bactéries exigeantes, notamment des espèces comme Haemophilus et certaines souches de Streptococcus, ont des besoins nutritionnels spécifiques qui peuvent ne pas être satisfaits par la gélose nutritive à usage général seule. Ils ont généralement besoin d'un milieu enrichi qui fournit des nutriments et des facteurs de croissance supplémentaires pour soutenir leur croissance.
◉ Quelle est la différence entre la gélose nutritive et le bouillon nutritif?
La gélose nutritive et le bouillon nutritif partagent presque la même composition de milieu. La principale différence entre eux réside dans le fait que :
- La gélose nutritive (milieu solide) contient un agent solidifiant, la poudre d'agar, qui provoque la solidification du milieu à température ambiante. En revanche, le bouillon nutritif (milieu liquide) ne comprend pas d’agar, restant à l’état liquide.
- La croissance bactérienne dans la gélose nutritive entraîne la formation de colonies, tandis que dans le bouillon nutritif, le bouillon devient plus trouble.
◉ Photos
Staphylococcus aureus sur gélose nutritive
Agar nutritive fondue avant de la verser dans une boîte de Pétri
Culture d'urine sur gélose nutritive
◈ Certaines colonies peuvent présenter une pigmentation caractéristique :
- Non diffusible : Serratia apparaît en rouge, Staphylococcus aureus peut apparaître en jaune doré sur la gélose nutritive.
- Diffuse : Pseudomonas aeruginosa présente une coloration vert moyen.
Pseudomonas sur gélose nutritive
Serratia sur gélose nutritive
◉ Conclusion
En conclusion, la gélose nutritive se distingue comme un milieu polyvalent et largement utilisé en microbiologie, facilitant la croissance d'un large éventail de bactéries, ce qui la rend parfaitement adaptée aux travaux de routine en laboratoire. Cependant, il est essentiel de noter que même si la gélose nutritive est efficace pour de nombreuses bactéries, elle peut ne pas favoriser la croissance d'organismes extrêmement exigeants ayant des besoins nutritionnels spécifiques.