Antibiogramme: Définition, Protocole, Interprétation

L'antibiogramme, également appelé test de sensibilité aux antibiotiques, est un test de laboratoire réalisé pour évaluer la réponse des bactéries aux antibiotiques. Cet article explique ce qu'est un antibiogramme, décrit son principe, ses différents types et ses étapes de réalisation


◉ Definition

Le test de sensibilité aux antibiotiques, ou antibiogramme, est un test in vitro qui détermine la sensibilité ou la résistance des bactéries à des antibiotiques spécifiques.

Il est réalisé en exposant le micro-organisme à différents antibiotiques dans un environnement de laboratoire contrôlé pour évaluer leur efficacité à inhiber ou à tuer les bactéries.

Les résultats des tests de sensibilité aux antibiotiques aident les cliniciens à choisir le ou les antibiotiques les plus efficaces pour traiter une infection bactérienne.

L'antibiogramme joue également un rôle crucial dans la surveillance des modèles de résistance bactérienne. En évaluant la sensibilité ou la résistance des bactéries à divers antibiotiques, il fournit des données précieuses sur la prévalence et les tendances de la résistance aux antibiotiques dans une population ou une zone géographique particulière.

◉ Méthodes et Types

Il existe plusieurs méthodes et techniques disponibles pour évaluer la sensibilité des bactéries aux antibiotiques:

◉ Principe

Les principes de l'antibiogramme reposent sur l'évaluation de la capacité des antibiotiques à inhiber la croissance des bactéries ou à les tuer.

◉ Quel milieu pour antibiogramme ?


🏾 Le milieu de culture doit permettre la croissance de nombreuses bactéries et il ne doit pas contenir d'inhibiteurs des antibiotiques:



🏾 Il doit être coulé en boîtes de Petri sur une épaisseur de 4 mm et les géloses doivent être séchées avant l'emploi.

NOTE:

Certaines espèces exigeantes, telles que Haemophilus spp., Neisseria gonorrhoeae, Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae et viridans et les streptocoques β-hémolytiques ne se développent pas suffisamment sur MH-agar non supplémenté (nécessitent des suppléments ou des milieux différents).

Si, juste avant utilisation, un excès d'humidité de surface est présent sur les plaques, placez-les dans un incubateur (35°C) ou une hotte à flux laminaire à température ambiante avec les couvercles entrouverts jusqu'à ce que l'excès d'humidité de surface soit éliminé par évaporation (généralement 10 à 30 minutes ).


◉ Les disques d'antibiotiques


Exemples de disques d'antibiotiques abréviations
SigleAntibiotiqueFamilleCharge du disque (µg)
AMAmpicillineAminopénicilline10
ATMAztréonamMonobactame30
GMGentamicineAminosides10
ETPErtapénèmeCarbapénème10

🏾 Toutes les abréviation de disques d'antibiotiques

🏾 L'antibiotique contenu dans le disque se solubilise dans l'eau de la gélose. Sa diffusion peut-être schématiquement présentée en deux étapes:

◉ Taille de l'inoculum '0.5 MF'


La suspension cellulaire doit être préparée dans de l'eau physiologique stérile à partir d'une culture jeune et pure sur milieu d'isolement approprié. Dans le cas de Neisseria gonorrhoeae, la suspension est préparée dans du tampon phosphate stérile à pH 7,2.

Elle doit être ajustée à l'aide d'un photomètre ou par comparaison avec un étalon d'opacité (échelle de McFarland).En Algérie, l'antibiogramme par diffusion est réalisé avec une suspension calibrée à 0,5 MF ou à une D.O. de 0,08 à 0,10 lue à 625 nm contenant environ 108 bactéries par ml.Ce nombre est porté à 109 pour Helicobacter pylori équivalente au standard McFarland 3.

0.5 MACFARLAND

☰ Préparation de l'étalon de turbidité 0,5 McFarland

Comment préparer l'étalon de 0,5 McFarland
1Ajouter 0,5 mL d'une solution à 0,048 mol/L de BaCl 2 (1,175% p/v BaCl 2 ·2H20) à 99,5 mL d'une solution 0,18 mol/L (0,36 N) de 2 S0 4 (1% v/v) et agiter vigoureusement
2Vérifier la densité de la suspension à l'aide d'un spectrophotomètre avec un faisceau de 1 cm et des cuvettes assorties. L'absorbance à 625 nm doit être comprise entre 0,08 et 0,13.
3Distribuer la suspension dans des tubes de même taille que ceux utilisés pour ajuster l'inoculum. Sceller les tubes.
4Une fois scellés, conserver ces tubes à température ambiante et à l'abri de la lumière. Avant usage, mélanger vigoureusement le tube à l'aide d'un Vortex (6 mois de conservation.).

◉ Ensemencement d'antibiogramme


🏾 l'ensemencement doit se faire dans les 15 minutes qui suivent la préparation de l'inoculum. Il est réalisé par écouvillonnage ou par inondation de telle façon à avoir après incubation des colonies distinctes mais jointives.

  1. Plonger l 'écouvillon dans la suspension et éliminer l 'excès de liquide en tournant l 'écouvillon sur les parois du tube.
  2. Frotter la surface entière de la boite d'agar trois fois, en faisant tourner la boite d'environ 60 ° C entre les stries pour assurer une distribution uniforme. Pour minimiser les aérosols, évitez de heurter les côtés de la plaque. Enfin, passez un tampon sur le bord de la gélose pour éliminer tout excès d'humidité.

◉ Application des disques


NOTE: Parce qu'une partie du médicament se diffuse presque instantanément, un disque ne doit pas être déplacé une fois qu'il a été en contact avec la surface de la gélose. Au lieu de cela, placez un nouveau disque dans un autre emplacement sur la gélose.

◉ Incubation de l'antibiogramme


Retourner les boîtes et les incuber idéalement dans les 15 min. qui suivent le dépôt des disques, sans dépasser 30 min. Si elles sont abandonnées à température ambiante après dépôt des disques, la pré-diffusion des antibiotiques engendrera des zones d'inhibition faussement agrandies

◉ Lecture et interpretation de l'antibiogramme


🏾 Après 16 à 18 heures d'incubation, examinez chaque plaque. Si la plaque a été striée de manière satisfaisante et que la concentration d'inoculum est correcte, les zones d'inhibition résultantes seront uniformément circulaires et il y aura une pelouse de croissance confluente.

- Si des colonies individuelles sont apparentes, la concentration de l'inoculum était trop légère et le test doit être répété.


🏾 Mesurer les diamètres des zones d'inhibition complète (comme jugé à l'œil nu), y compris le diamètre du disque. Mesurez les zones au millimètre entier le plus proche, à l'aide d'étriers coulissants ou d'une règle.

🏾 Comparer le diamètre d'inhibition mesuré (∅ mesuré) et les diamètres critiques d(CCsup) et D(CCinf) selon CLSI "Clinical & Laboratory Standards Institute" ou EUCAST

Mesurer le diamètre de la zone d'inhibition (∅ mesuré) et le comparer aux diamètres des concentrations critiques inférieure et supérieure (d(CCsup) et D(CCinf))
∅ mesuré ≥ D(CCinf)Sensible (S)
∅ mesuré < d(CCsup)Résistant (R)
d(CCsup) ≤ ∅ mesuré < D(CCinf)Intermédiaire (I)

Antibiogram interpretation

Lecture d'antibiogramme