Staphylococcus: Tests, Caractères Bactériologiques, Culture et Identification


◉ Généralité


◉ Les étapes

L'identification des staphylocoques dans une culture bactérienne est souvent facilitée par une série de tests et un raisonnement logique. Voici les principales étapes :

staphylocoque-taxonomy

◉ Culture et Milieux de Culture

Pendant une incubation à 35 °C sur une période de 24 à 48 heures, les staphylocoques présentent une croissance rapide sur divers milieux. Les colonies varient de 1 à 3 mm de diamètre en 24 heures et de 3 à 8 mm après 72 heures d'incubation.

Il convient de noter que des exceptions existent, telles que celles de S. aureus subsp. anaerobius, S. saccharolyticus, S. auricularis, S. equorum, S. vitulinus et S. lentus, qui ont une croissance plus lente et nécessitent généralement de 24 à 36 heures pour un développement de colonies détectable

Sur gélose au sang, Staphylococcus aureus forme des colonies typiques pigmentées, présentant une couleur variant de crème/gris/gris-blanc avec une teinte jaunâtre allant du jaune à l'orange. Ces colonies sont lisses, entières, légèrement surélevées, et démontrent un caractère hémolytique.

culture Staphylococcus aureus

Les staphylocoques à coagulase négative (SCN), notamment S. epidermidis, présentent des colonies blanches, bien que certaines souches et espèces de SCN puissent développer des colonies avec un léger pigment crème.

Généralement, les souches SCN ne sont pas hémolytiques, bien que certaines puissent produire une petite zone de bêta-hémolyse sur la gélose au sang, comme c'est le cas pour S. haemolyticus et S. lugdunensis.

SCN

◇ Les variants formant colonies naines (VCS) de Staphylococcus sont caractérisés par des colonies ponctuelles (1/10 de la taille du type sauvage), pour la plupart non pigmentées et non hémolytiques après 24 à 72 h d'incubation


☰ Comme S. aureus est fréquemment isolé dans des cultures mixtes, des milieux sélectifs et différentiels sont utilisés pour faciliter la détection de ces organismes dans le matériel clinique :

◉ Staphylococcus Identification du genre

Le premier trait caractéristique qui permet de distinguer le staphylocoque est qu'il s'agit d'une cocci gram-positif (observable sous microscope après une coloration de Gram). Cependant, il est important de noter que d'autres bactéries telles que les streptocoques, les enterocoques et les microcoques partagent également cette caractéristique.

Le deuxième caractère recherché chez les staphylocoques est qu'ils sont catalase positifs. positifs. Cette caractéristique permet de distinguer les staphylocoques et microcoques qui sont catalase positifs, des entérocoques et des streptocoques qui sont catalase négatifs.

Note: La catalase est un caractère constant chez les staphylocoques, malgré quelques rares cas rapportés de S. aureus à catalase négative .

différencier les Staphylococcus et les Micrococcus des Streptococcus

La différenciation entre le genre Staphylococcus et le genre Micrococcus n'est pas toujours évidente en raison d'une ressemblance des colonies sur gélose et le catalase positive. Cependant, il existe certains critères permettant de distinguer entre les deux genres :


◉ Staphylococcus Identification de l'espèce

Il existe plusieurs tests de laboratoire utilisés pour différencier les différentes espèces de staphylocoques, en particulier pour distinguer Staphylococcus aureus des autres espèces (SCN). Parmi ces tests:

Test de coagulase

La capacité de coaguler le plasma est un critère largement utilisé en laboratoire pour différencier le Staphylococcus aureus des autres espèces. Il existe deux méthodes :

1- Test de coagulase en tube

Note: Lors de l'utilisation d'un plasma provenant d'un tube citraté pour le test de coagulase en tube, il est important de noter que des organismes tels que Enterococcus faecalis, Pseudomonas, Serratia marcescens, et certaines souches de Streptococcus, qui utilisent le citrate, peuvent consommer ce dernier, entraînant un résultat faussement positif.

diagnostic-staphylocoque

1- Test de coagulase sur lame


Pour plus d'informations sur le test de coagulase, veuillez consulter notre article : "Test de coagulase"

Test d'agglutination

Afin de surmonter les limitations telles que la faible sensibilité et spécificité du test d'agglutination sur lame classique, ainsi que le long temps d'incubation du test de coagulase en tube, des alternatives plus rapides ont été développées. Parmi celles-ci, on compte les tests rapides au latex et d'hémagglutination, qui permettent une identification présomptive rapide de Staphylococcus aureus.

Le test repose sur l'utilisation d'anticorps spécifiques dirigés contre des antigènes de surface de Staphylococcus aureus. Lorsque ces anticorps réagissent avec les antigènes correspondants sur les cellules bactériennes, cela entraîne la formation d'agrégats, provoquant une agglutination visible.

Les tests de troisième génération comprennent l'utilisation d'anticorps monoclonaux qui reconnaissent les sérotypes de polysaccharides capsulaires les plus couramment rencontrés sur le plan clinique (1, 5, 6, 8, 10).

Parmi ces tests, on peut citer Pastorex Staph-Plus (Bio-Rad), Slidex Staph Plus (bioMérieux), Staphaurex Plus et Staphytect Plus (Oxoid).

diagnostic-staphylocoque

Note: Cette technique doit être interprétée prudemment en raison de la possibilité de résultats faussement positifs ou faussement négatifs.

DNase test

Pour plus d'informations sur le test de DNase, veuillez consulter notre article : "Test Désoxyribonucléase (DNase)"

DNase test diagnostic-staphylocoque

La résistance à la novobiocine

La résistance à la novobiocine est inhérente à S. saprophyticus, mais elle est rare chez d'autres espèces de staphylocoques cliniquement importantes, et cette résistance est donc utilisée pour distinguer S. saprophyticus des autres staphylocoques.

Test ornithine décarboxylase

◉ L'identification complète

Pour une identification complète des staphylocoques, plusieurs méthodes peuvent être utilisées, notamment:

Identification biochimique

L'identification biochimique complète des staphylocoques implique l'utilisation de tests qui évaluent différentes caractéristiques métaboliques et biochimiques des bactéries.

1- La galerie biochimique d'identification


Identification basées sur les acides nucléiques

L'identification des staphylocoques par acides nucléiques utilise des techniques de biologie moléculaire basées sur l'analyse de l'ADN.

Note: Il est important de noter que des erreurs d'identification peuvent se produire, notamment en raison de souches de S. aureus fem négatives et de CoNS ayant des gènes liés à femA.

◉ Sensibilité aux antibiotiques et traitement des staphylocoques

Les anti-staphylococciques sont présents dans toutes les familles d'antibiotiques, à l'exception des polymyxines et des imidazolés. Les classes d'anti-staphylococciques les plus couramment utilisées comprennent :

D'autres antibiotiques sont également employés, tels que les streptogramines (pristinamycine), les macrolides, la clindamycine, le cotrimoxazole, la rifampicine, l'acide fusidique et la fosfomycine. Ces trois dernières molécules sont souvent administrées en association en raison des fréquences élevées de mutations.

◈ Pour obtenir davantage d'informations sur la réalisation d'un antibiogramme, veuillez consulter notre article: "Antibiogramme"

◈ Pour des détails spécifiques sur l'antibiogramme des staphylocoques, consultez notre article: "Antibiogramme de Staphylocoque"

◉ Conclusion

En conclusion, l'identification précise des staphylocoques revêt une importance capitale dans le domaine de la microbiologie médicale. Les avancées constantes dans les techniques d'analyse, des tests biochimiques traditionnels aux méthodes de biologie moléculaire innovantes, ont considérablement amélioré notre capacité à caractériser ces bactéries pathogènes.

Reference

  1. - NCBI/GenBank:Taxonomy-Browser
  2. - American society for microbiology
  3. - Biorad : PASTOREX™ STAPH-PLUS manual
  4. - Staphaurex Plus manual
  5. - Planche : Diagnostic bactériologique staph , DR.Hamzaoui lina
  6. - Kateete et al. Annals of Clinical Microbiology and Antimicrobials, Identification of Staphylococcus aureus: DNase and Mannitol salt agar
  7. - T. Rasamiravaka et al, Human Plasma Tube Coagulase Test for Identification of Staphylococcus aureus : Can we routinely use it ?
  8. - UK Standards for Microbiology Investigations
  9. - tcs bioscience : RABBIT COAGULASE PLASMA
  10. - Journal of Laboratory Physicians : Mannitol‑fermenting and Tube Coagulase‑negative Staphylococcal Isolates:
  11. - HAL : Restoring catalase activity in Staphylococcus aureus subsp. anaerobius leads to loss of pathogenicity for lambs
  12. - Manual of clinical microbiology 11ed
  13. - Textbook of Microbiology 4ed