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La gélose Chapman ou gélose au sel de mannitol est un milieu sélectif utilisé pour l'isolement, le dénombrement et la différenciation des Staphylococcus à partir d'échantillons cliniques, alimentaires, antiseptiques et cosmétiques.
Ce milieu est à la fois une gélose sélective et différentielle. Le milieu sélectionnera des organismes qui peuvent vivre dans des zones à forte concentration en sel (chlorure de sodium) et la fermentation du mannitol, mise en évidence par le virage au jaune de l’indicateur pH (rouge de phénol), permet d’orienter le diagnostic.
Gélose de Chapman (@lablife)
◈ La sélectivité de ce milieu est basée sur la présence de chlorures de sodium (7.5%) qui inhibe la plupart des bactéries à Gram négatif et à Gram positif.
◈ La différenciation est basée sur la capacité à fermenter ou non le mannitol (le seul sucre du milieu). S'il y a fermentation, cela induit une acidification qui entraîne, à des niveaux de PH inférieurs à 6.9, une coloration jaune du milieu en présence de rouge de phénol (indicateur de PH).
S. coagulase négative (à gauche) et S. aureus (à droite).(8)
🏾 Pour 1 litre de milieu :
Composition gélose Chapman |
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|---|---|---|---|
| Ingrédients | gramme/litre | ||
| Peptone | 10 g | ||
| Extrait de viande de boeuf | 1 g | ||
| Chlorure de sodium | 75g | ||
| Mannitol | 10g | ||
| Rouge de phénol | 0,025g | ||
| Gélose | 15g | ||
| pH final | 7,4 ± 0,2 | ||
Gélose Chapman déshydratée
Mettre 111 grammes de milieu déshydraté dans un litre d’eau distillée stérile. Mélanger jusqu’à obtention d’une suspension homogène. Chauffer lentement en agitant fréquemment, puis porter à ébullition jusqu’à dissolution complète. Stériliser à l’autoclave à 121° C pendant 15 minutes. Répartir en boîtes de Petri ou en flacons.
Faire fondre le contenu du flacon au bain-marie à 100°C (en desserrant le bouchon partiellement retiré) jusqu'à dissolution complète. Revisser ensuite le bouchon et vérifier l'homogénéité du milieu dissous, si c'est le cas en retournant le flacon. Refroidir à 45-50°C, bien mélanger en évitant la formation de mousse et répartir aseptiquement dans des boîtes de Pétri.
Gélose Chapman préparée
- Les staphylocoques aureus forment des colonies luxuriantes, pigmentées, entourées d’une auréole jaune due à la fermentation du mannitol. Les staphylocoques non pathogènes forment en général de petites colonies rouges qui ne modifient pas la teinte du milieu.
Note : le changement de couleur du milieu démontre la fermentation du mannitol, PAS la couleur de la colonie. Ceci est particulièrement important car de nombreux microcoques sont pigmentés.
- Plusieurs espèces de Staphylococcus autres que S. aureus sont positives au mannitol et produisent des colonies de couleur jaune entourées de zones jaunes (ex: S. capitis, S. xylosus, S. cohnii, S. sciuri, S. simulans..). Par conséquent, des tests biochimiques supplémentaires sont nécessaires à l’identification de S. aureus ou d’autres espèces.
MicrobeLibrery: (A).Staphylococcus aureus: Un grand halo jaune autour de la croissance indique la fermentation du mannitol.
(B). Staphylococcus epidermidis: Croissance mais pas de changement de couleur du milieu indiquant l'absence de fermentation du mannitol.
(C). Staphylococcus saprophyticus: Un petit halo jaune autour de la croissance indique la fermentation du mannitol. (10 % de S. saprophyticus fermentent le mannitol
(D). E. coli: Pas de croissance. Inhibé par le NaCl 7,5%.
- Chapman avec oxacilline peut être utilisé pour dépister la présence de SARM dans les échantillons nasaux, car le sel à 7,5% et 6 g d'oxacilline dans ce milieu inhibent la plupart des autres organismes qui colonisent normalement les narines.
- L'ajout de 5% v/v d'émulsion de jaune d'œuf permet la détection de l'activité lipase des staphylocoques ainsi que la fermentation du mannitol. Le sel nettoie l'émulsion de jaune d'œuf et la production de lipase est détectée sous la forme d'une zone opaque jaune autour des colonies.
Références: