Ⅰ. Généralité
Le test de la coagulase différencie les souches de Staphylococcus
aureus
des autres
espèces à coagulase négative (SCN).
La coagulase est une protéine semblable à une enzyme qui provoque la coagulation du plasma en
convertissant le fibrinogène en fibrine. Le Staphylococcus aureus produit deux formes de coagulase :
- Coagulase libre : Convertit le fibrinogène en fibrine, la coagulase libre est détectée par le test de coagulase en tube.
- Coagulase liée : La coagulase liée à la paroi cellulaire (c'est-à-dire le facteur d'agglutination) est détectée par le test de coagulase sur lame..
❏ Pour les deux tests, des grumeaux ou des caillots de toute taille indiquent
une réponse
positive
Ⅱ. La coagulase libre
Le test de coagulase en tube est effectué en mélangeant des
cellules bactériennes dans un plus grand
volume de plasma dans un petit tube à essai.
Au fur et à mesure que les bactéries se multiplient
dans le plasma, elles sécrètent de la staphylocoagulase qui
réagit avec un facteur plasmatique de
globuline (facteur de
réaction de la
coagulase) pour former la staphylothrombine (staphylocoagulase + prothrombine).
La
staphylothrombine
catalyse alors la
dégradation du
fibrinogène en fibrine insoluble qui forme alors le caillot.
☰ Comment faire Le test de la coagulase en tube :
❶ Étiquetez le tube à essai avec le numéro de la souche à tester.
❷ À l'aide de la pipette, transférez de manière aseptique 0,5 ml du plasma reconstitué
dans le tube à
essai.
❸ Sélectionnez deux ou trois colonies isolées de bactéries à tester et collectez-les à
l'aide de la
boucle stérile ou du bâtonnet applicateur.
❹ Émulsionnez les bactéries dans les 0,5 ml de plasma et les placer dans l'incubateur
❺ Notez l'heure à laquelle le test a commencé. Observez la culture à intervalles
réguliers, au cours
des quatre heures qui suivent, à la recherche de la présence d'un caillot. Toute formation
de caillot est
un résultat positif.
❻ Si aucun caillot n’est observé au bout de 4 heures, l’essai peut être poursuivi avec
une incubation
pendant une nuit à la température ambiante et une observation finale à 24 heures.
❼ L'organisme de contrôle positif devrait présenter une coagulation au bout de 24
heures,
contrairement à l'organisme de contrôle négatif.
❽ Une fois le test terminé, éliminez les matériaux contaminés de manière appropriée.
NB :
- Pour le test de coagulase en tube, le plasma EDTA est plus fiable au plasma citraté car les
organismes utilisant le
citrate tels que les espèces Pseudomonas, Serratia marcescens, Enterococcus faecalis et
certaines souches de
Streptococcus
coaguleront le plasma citraté.
- Certaines autres espèces de staphylocoques, notamment Staphylococcus schleiferi et Staphylococcus
intermedius,
peuvent donner des résultats positifs au test de coagulase en tube
- Le test de coagulase en tube ne doit pas être indûment agité car cela peut provoquer le
rétrécissement du caillot,
donnant également un faux résultat négatif.
Ⅲ. La coagulase liée (facteur d'agglutination)
- La coagulase liée est une protéine située à la surface de la paroi de
Staphylococcus aureus, en
position externe. Elle
a une structure complémentaire de celle du fibrinogène et constitue donc un récepteur du
fibrinogène.
-La coagulase liée peut être détectée par un test d'agglutination sur lame,
dans lequel une suspension de l'organisme est émulsionnée sur une lame avec une goutte de plasma de
lapin. Si la coagulase liée est présente, les organismes
s'agglutinent ( L'agglutination se produira parce que le facteur d'agrégation est
une
adhésine, un membre de la famille MSCRAMM de molécules d'adhésion, qui amène les cellules à
se lier
au fibrinogène dans le plasma ). Pour une
interprétation
correcte de ce test, un contrôle dans lequel une solution saline est utilisée à la place du plasma
est
nécessaire pour vérifier l'auto-agglutination.
Ⅳ. Le plasma humain peut-il être utilisé pour le test de la
coagulase?
- Lors de l'utilisation de plasma humain pour le test de la coagulase , la
production d'anticorps et
la circulation
d'antibiotiques doivent également être prises en compte, car les deux peuvent donner des réactions
faussement négatives.
- Le citrate peut provoquer des réactions faussement positives par l'action de
micro-organismes
contaminants qui
utilisent le citrate dans le plasma (telles que Enterococcus faecalis peuvent détruire
l'anticoagulant et provoquer
une
coagulation)
- L'EDTA n'est pas utilisé par les bactéries et ne donnera donc pas lieu à des réactions
de coagulase
faussement
positives.
- Lors de l'utilisation de plasma humain, il est conseillé de regrouper les
échantillons d'au moins 5
à 10 personnes,
puis de les distribuer en petites aliquotes suffisantes pour durer 1 semaine et de congeler le reste
jusqu'à ce que
cela
soit nécessaire. Cela aidera à éliminer les erreurs dues à une insuffisance de fibrinogène ou à la
présence de
substances inhibitrices dans l’échantillon d’un patient en particulier
- Différents volumes (0.5 ml, 2 ml, 5 ml) avec des Différentes dilutions (1/5, 1/6, 1 /10) de
plasma
sont proposés
.
- NB : Le test de la coagulase ne doit pas être effectué à partir de la croissance sur gélose
au sel de
mannitol (la
teneur
en sel peut créer de faux positifs).
Ⅴ. Test de la coagulase à partir du bouillon d'hémoculture
- Le bouillon d'hémoculture qui a été incubé pendant 18 heures est prélevé et une dilution 1:10 est
préparée en mettant en suspension 10 gouttes (0,25 ml) de bouillon d'hémoculture dans 2,5 ml de
solution
saline à 0,9%.
Après un bref tourbillon (vortexing), 4 gouttes (0,1 ml) sont ajoutées aux 1 ml de plasma de
lapin.
- Le tube est examiné après 4 heures d'incubation aérobie. Puis incubé pendant une nuit
à
température ambiante et réexaminé. Le test est enregistré comme positif si un caillot est
observé à
l'un ou l'autre moment.
