Recherche de la catalase

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Ⅰ. Introduction

Pour survivre, les organismes doivent s’appuyer sur des mécanismes de défense qui leur permettent de réparer ou d’échapper aux dommages oxydatifs du peroxyde d’hydrogène (H2O2). Certaines bactéries produisent l’enzyme "Catalase" qui facilite la désintoxication cellulaire.

La Catalase neutralise les effets bactéricides du peroxyde d’hydrogène et sa concentration dans les bactéries a été corrélée avec la pathogénicité

En 1893, une publication de Gottstein attire l’attention sur la catalase bactérienne, ce qui en fait l’une des premières enzymes bactériennes à être décrite. Une trentaine d’années plus tard, Mcleod et Gordon ont élaboré et publié ce qui est considéré comme le premier système de classification bactérienne fondé sur la production et les réactions de catalase.

Ⅱ. Objectif

La détection de la présence de la catalase chez les bactéries est essentielle pour différencier les Staphylococcaceae et Micrococcaceae catalase-positive des Streptococcaceae catalase-négative.

Bien qu’elle soit principalement utile pour différencier entre ces genres, il est également utile dans la distinction entre les espèces appartenant au même genre comme Aerococcus urinae (catalase positif) et Aerococcus viridians (catalase négatif) et des organismes gram négatifs comme Campylobacter fetus, Campylobacter jejuni et Campylobacter coli (catalase positif) d’autres espèces de Campylobacter (catalase négatif)

Le test de catalase est également utile pour différencier entre les bactéries aérobies et anaérobies obligatoires, car ces derniers sont généralement dépourvus de l’enzyme Dans ce contexte, le test de catalase sert également à différencier les souches aérotolérantes de Clostridium, qui sont catalase négative, de Bacillus, qui catalase positive

Ⅲ. Principe du test catalase

L’enzyme catalase sert à neutraliser les effets bactéricides du peroxyde d’hydrogène. La catalase accélère la décomposition du peroxyde d’hydrogène (H2O2) en eau et oxygène (2H 2O 2 + Catalase 2H2O + O2).

H2O2 = 2H2O + O2

Cette réaction est évidente par la formation rapide de bulles

cmv œil de hibou

Ⅳ. Réactifs

- Utiliser du peroxyde d’hydrogène à 3% disponible sur le marché pour tester une souche de bactérie aérobie. Conservez le peroxyde d'hydrogène au réfrigérateur dans une bouteille sombre.

- Pour l’identification des bactéries anaérobies, une solution à 15 % H2O2 est nécessaire.

Ⅴ. Protocol du test catalase

Il existe de nombreuses variantes de méthode du test de la catalase. Celles-ci incluent le test de la catalase sur lame ou goutte, la méthode du tube, la catalase semi-quantitative pour l'identification de Mycobacterium tuberculosis, la catalase thermostable utilisée pour la différenciation des espèces de Mycobacterium et la méthode du tube capillaire et du couvre-objet .

La méthode la plus populaire en bactériologie clinique est la méthode de la catalase sur lame ou en goutte, car elle nécessite une petite quantité de culture et repose sur une technique relativement peu compliquée.

1-La catalase sur lame

❶ Placez une lame de microscope à l'intérieur d'une boîte de Pétri.

❷ Gardez le couvercle de la boîte de Pétri à disposition. L'utilisation d'une boîte de Pétri est facultative car la méthode peut être effectuée correctement sans elle. Elle vise à limiter les aérosols dont il a été démontré qu'ils portaient des cellules bactériennes viables.

❸À l'aide d'une anse d'inoculation stérile ou d'un bâtonnet d'application en bois, prélevez une colonie bien isolée d’une culture pure (18 à 24 heures d’incubation) et placez-la sur la lame de microscope.

❹ Veillez à ne pas prendre d'agar. Ceci est particulièrement important si la cuture a été réalisée sur une gélose au sang. Les globules rouges peuvent entraîner une réaction faussement positive.

Remarque : Si une boucle d’inoculation de platine est utilisée : le fil de platine dans la boucle peut produire un résultat faux positif. Ce n’est pas le cas avec Fil Nichrome.

❺ À l'aide d'un compte-gouttes ou d'une pipette Pasteur, déposez 1 goutte de H2O + O2 à 3% sur la colonie. Ne pas mélanger.

❻ Couvrez immédiatement la boîte de Pétri avec un couvercle et observez la formation immédiate de bulles (O 2 + eau = bulles).


NB :

- L’observation de la formation de bulles sur un fond sombre améliore la lisibilité.

- Utilisez une loupe pour observer les réactions positives faibles. Un microscope peut également être utilisé. Dans ce cas, placez une lamelle sur la lame et visualisez sous un grossissement de 40 fois.

- L’absence de la formation de bulles (aucune enzyme catalase pour hydrolyser le peroxyde d'hydrogène) représente une réaction négative

2-Catalase en tube

❏ Ajouter 4 à 5 gouttes de H2O2 à 3% dans un tube à essai de 12 x 75 mm. À l'aide d'un bâtonnet en bois, prélevez une colonie bien isolée de la souche à tester et placez-la dans le tube à essai.

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3-Méthode du tube (oblique)

❏ Ajouter 1,0 ml de H2O2 à 3% directement sur une culture pure fortement inoculée de 18 à 24 heures et cultivée sur une inclinaison de la gélose nutritive. Placez le tube sur un fond sombre et observez la formation immédiate de bulles.

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Ⅵ. Cas particuliers du test catalase

1- Catalase test Mycobacterium tuberculosis :

Le test semi-quantitatif à la catalase divise les mycobactéries en 2 groupes, ceux produisant moins de 45 mm de bulles (Positif) et ceux produisant plus de 45 mm de bulles (Négatif) :

⤠ Habituellement, Mycobacterium kansasii, Mycobacterium simiae, la plupart des scotochromogènes*, les saprophytes non photochromogènes et les cultures à croissance rapide produisent plus de 45 mm de bulles.

⤠ Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium marinum, le complexe Mycobacterium avium, Mycobacterium xenopi et Mycobacterium gastri sont parmi ceux qui produisent moins de 45 mm de bulles.

Protocol :

1. Inoculer à Lowenstein-Jensen 0,1 ml d'une culture liquide de 7 jours de l'isolat à tester ou d’une culture active sur milieu solide prélevée à l’aide d’une anse remplie

2. Inclure les organismes de contrôle positifs et négatifs.

3. Incuber les tubes dans 8-10% de CO2 à 33-37 ° C avec les bouchons desserrés pendant 2 semaines.

4. Après incubation, ajouter 0,5 ml de réactif catalase (mélange 1 : 1 de Polysorbate® 80 à 10% (REF R21275) et de peroxyde d'hydrogène à 30%) à la culture.

5. Placer les tubes à la verticale dans un support placé sur du papier absorbant imbibé de désinfectant. La colonne de bulles produite peut déborder du tube si le capuchon n'est pas remplacé et serré assez rapidement.

6. Laisser les tubes reposer à la température ambiante pendant 5 minutes avant de les mesurer. Mesurer en millimètres la hauteur de la colonne de bulles au-dessus de la surface moyenne.

Positif - Une colonne de bulles supérieure à 45 mm

Négatif - Une colonne de bulles inférieure à 45 mm

catalase test mycobacterium tuberculosis
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2- Catalase test Neisseria gonorrhoeae :

Le test Superoxol est un test rapide qui peut être utilisé pour l'identification présomptive de Neisseria gonorrhea. Il est similaire au test Catalase dans lequel la solution à 3% de peroxyde d'hydrogène (H2O2) est remplacée par une solution à 30% de peroxyde d'hydrogène. Les souches de N. gonorrhoeae produisent des bulles immédiates et vigoureuses

N. meningitidis et N. lactamica, ainsi que d’autres espèces qui poussent sur des milieux sélectifs, produisent généralement des bulles faibles et retardées, bien que certains isolats de N. meningitidis puissent également produire des bulles immédiates et vigoureuses similaires au gonocoque.

* Scotochromogènes :

Des mycobactéries dont les colonies sont pigmentées d'office, sans influence de la lumière.

  • • Mycobacterium scrofulaceum = Mycobacterium marianum rencontré surtout dans les adénites cervicales chez les enfants.
  • • Mycobacterium aquae est un saprophyte (tartre des robinets).
  • • Mycobacterium xenopi est un saprophyte assez répandu. Il donne des colonies jaunes, lisses.