◉ Résultat : Un résultat positif est indiqué par la présence d'une couleur rose vif (fuchsia) dans la gélose inclinée. Un résultat négatif si pas de changement de couleur dans la gélose inclinée
Test à l'uréase | Principe | Protocole | Résultats
☰ Sommaire :
- Ⅰ. Principe
- Ⅱ. Procédure et résultats
- Ⅲ. Cas de Helicobacter pylori
- Ⅳ. Uréase test positif et négatif
- Ⅴ. Limites et conseils techniques
Reoch , en 1875, a proposé de tester la fermentation alcaline de l'urée et la production d'ammoniac par les bactéries pour déterminer la capacité d'un organisme à produire l’uréase, l’alcalinisation provoque une coloration rouge violacé du milieu en présence de rouge de phénol
- Il peut être utilisé pour détecter la présence d'Helicobacter pylori
- Ce test peut aussi être utilisé pour différencier les levures : Candida albicans (uréase négatif) et Cryptococcus neoformans (production rapide d'uréase).
Ⅰ. Principe
● L'hydrolyse de l'urée par l'uréase, enzyme exprimée de manière constitutive, produit de l'ammoniac et du CO2. La formation d'ammoniac alcalinise le milieu et le changement de pH est détecté par le changement de couleur du rouge de phénol de l'orange clair à pH 6,8 au magenta (rose) à pH 8,1.
la réaction de l'Uréase test
Ⅱ. Procédure et résultats
Deux types de milieux sont couramment utilisés pour détecter l'activité de l'uréase :
Milieu solide : Gélose à l'urée inclinée de Christensen
- Inoculer fortement la pente (à partir d'une culture pure de 18 à 24 heures) en striant la surface de la gélose en zigzag.
- Incuber les tubes inoculés avec les bouchons desserrés à 35-37°C pendant 24-48 heures
- Examiner les pentes pour le changement de couleur après 6 heures et après une nuit d'incubation. Des périodes plus longues peuvent être nécessaires
(A) non ensemencé, (B)Proteus mirabilis (uréase positive rapide), (C) Klebsiella pneumoniae (uréase positive retardée), (D) Escherichia coli (uréase négative). (ASM MicrobeLibrery)
Milieu liquide : Bouillon à l'urée Rustigian et Stuart
- Inoculer le bouillon abondamment à partir d'une culture pure de 18 à 24 heures
- Agiter doucement le tube pour suspendre les colonies
- Incuber les tubes ensemencés avec les bouchons desserrés à 35°C dans un incubateur ou un bain-marie pendant 24-48 heures
- Examiner les bouillons pour le changement de couleur à 8, 12, 24 et 48 heures d'incubation
Résultats Uréase test réaction (source :ASM MicrobeLibrery)
◉ Résultat : Un résultat positif est indiqué par la présence d'une couleur rose vif (fuchsia) dans le bouillon. Un résultat négatif si pas de changement de couleur dans le bouillon.
Ⅲ- Cas de Helicobacter pylori
Helicobacter pylori divise l'urée rapidement, généralement en moins de 30 secondes. Sa rapidité est un facteur de distinction clé pour H. pylori des autres espèces d'Helicobacter.
De nombreux tests et milieux spéciaux ont été développés pour la détection de H. pylori en laboratoire clinique.
1- Test rapide à l'uréase
Le test Rapide à l'uréase , également connu sous le nom de test CLO (Campylobacter-like organism test), est un test rapide pour le diagnostic de l'infection à Helicobacter pylori. Le principe du test est la capacité de H. pylori à sécréter l'enzyme uréase, l'échantillon (ex : biopsie gastrique) est placé dans un gel contenant de l'urée. L'uréase produite par H. pylori hydrolyse rapidement l'urée, produisant de l'ammoniac, ce qui entraîne un changement de couleur de l'indicateur
CLO test(Atlas of Bacteriology)
◉ Résultat : Les résultats peuvent être interprétés en 1 minute jusqu'à 3 heures, bien que le test CLO puisse être suspendu jusqu'à 24 heures dans certains cas
2- Test respiratoire à l'urée
Le test respiratoire à l'urée est généralement considéré comme un test simple, non invasif et précis pour démontrer l'infection à Helicobacter pylori.
Le principe du test est simple. L'urée administrée par voie orale, marquée isotopiquement au 14C ou au 13C (choix préférable), est hydrolysée par l'enzyme uréase de H. pylori et le CO2 marqué est expiré dans le souffle.
Le CO2 marqué est détecté soit par un compteur à scintillation (Carbon-14) et une spectrométrie de masse à rapport isotopique, soit par spectrométrie de corrélation de masse (Carbon-13).
L'indication principale de l'UBT est la confirmation d'une éradication réussie avec une sensibilité et de spécificité compris entre 95 et 100 %. Pour éviter des résultats faussement négatifs, les tests doivent être effectués 4 à 6 semaines après la fin du traitement et 5 jours après la fin des antiacides.
Le test est également un outil idéal pour vérifier l'infection lorsqu'un ulcère est trouvé à l'endoscopie, mais les échantillons de biopsie ne peuvent pas être prélevés en raison du traitement anticoagulant.
Test respiratoire à l'urée
Ⅳ- Uréase test positif et négatif
◍ Bactéries Uréase positif et négatif (9, 10, 11) |
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|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Bactéries | Uréase positif | Uréase variable | Uréase négatif | ||||||
| Enterobacteriaceae | Proteus , Klebsiella (lent) | / | Salmonella, Citrobacter, Escherichia coli, Edwardsiella, Shigella, Providencia, Enterobacter, Hafnia alvei, Serratia marcescens et liquefaciens | ||||||
| Yersinia spp. | Y.enterocolitica, Y.pseudotuberculosis | / | Y.pestis | ||||||
| Vibrionaceae | / | / | Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio | ||||||
| Haemophilus influenzae | biotypes : I II III IV | / | biotypes : V VI VII VIII | ||||||
| Bordetella spp. | B. parapertussis(24 h), B. bronchiseptica(24 h) | / | B. pertussis, B. trematum, B. holmesii | ||||||
| Brucella spp. | B. suis , B. canis (fast) | B. melitensis B. abortus (plus long ou peut être négatif) | / | ||||||
| Bartonella spp. | / | / | Bartonella spp. | ||||||
| Helicobacter species | H. pylori, H. heilmannii | / | H. cinaedi, H. fennelliae | ||||||
| Ureaplasma urealyticum | Ureaplasma urealyticum | / | / | ||||||
| Streptococcus spp | S. vestibularis (Groupe Salivarius) | / | Groupe Mitis, Groupe Anginosus, Groupe Mutans | ||||||
Ⅴ- Limites et conseils techniques
- Le bouillon à l'urée est un milieu hautement tamponné nécessitant de grandes quantités d'ammoniac pour élever le pH au-dessus de 8,0, ce qui entraîne un changement de couleur.
- Les milieux d'urée s'ils sont exposés à la lumière peuvent développer du peroxyde, ce qui peut interférer avec le test d'uréase. L'urée est également connue pour subir une auto-hydrolyse; il est donc conseillé de conserver les milieux au réfrigérateur à 4-8°C.
Références:
- Public health England : Identification of Enterobacteriaceae
- Public health England : Urease test
- Biorad manuel : UREA INDOLE
- American society for microbiology : Urease Test Protocol
- ASM MicrobeLibrery
- M Peeters: a diagnostic tool in the management of Helicobacter pylori-related gastrointestinal diseases
- Senthilkumar Sankararaman; Leila Moosavi : Urea Breath Test
- Color Atlas of Medical Bacteriology (ASM Books) 3rd Edition