Test à l'uréase | Principe | Protocole | Résultats

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Reoch , en 1875, a proposé de tester la fermentation alcaline de l'urée et la production d'ammoniac par les bactéries pour déterminer la capacité d'un organisme à produire l’uréase, l’alcalinisation provoque une coloration rouge violacé du milieu en présence de rouge de phénol

- Il peut être utilisé pour détecter la présence d'Helicobacter pylori

- Ce test peut aussi être utilisé pour différencier les levures : Candida albicans (uréase négatif) et Cryptococcus neoformans (production rapide d'uréase).

Ⅰ. Principe

● L'hydrolyse de l'urée par l'uréase, enzyme exprimée de manière constitutive, produit de l'ammoniac et du CO2. La formation d'ammoniac alcalinise le milieu et le changement de pH est détecté par le changement de couleur du rouge de phénol de l'orange clair à pH 6,8 au magenta (rose) à pH 8,1.

Uréase-réaction

la réaction de l'Uréase test



Ⅱ. Procédure et résultats

Deux types de milieux sont couramment utilisés pour détecter l'activité de l'uréase :

Milieu solide : Gélose à l'urée inclinée de Christensen

◉ Résultat : Un résultat positif est indiqué par la présence d'une couleur rose vif (fuchsia) dans la gélose inclinée. Un résultat négatif si pas de changement de couleur dans la gélose inclinée


Milieu liquide : Bouillon à l'urée Rustigian et Stuart

◉ Résultat : Un résultat positif est indiqué par la présence d'une couleur rose vif (fuchsia) dans le bouillon. Un résultat négatif si pas de changement de couleur dans le bouillon.



Ⅲ- Cas de Helicobacter pylori

Helicobacter pylori divise l'urée rapidement, généralement en moins de 30 secondes. Sa rapidité est un facteur de distinction clé pour H. pylori des autres espèces d'Helicobacter.

De nombreux tests et milieux spéciaux ont été développés pour la détection de H. pylori en laboratoire clinique.

1- Test rapide à l'uréase

◉ Résultat : Les résultats peuvent être interprétés en 1 minute jusqu'à 3 heures, bien que le test CLO puisse être suspendu jusqu'à 24 heures dans certains cas


2- Test respiratoire à l'urée



Ⅳ- Uréase test positif et négatif

◍ Bactéries Uréase positif et négatif (9, 10, 11)

Bactéries Uréase positif Uréase variable Uréase négatif
Enterobacteriaceae Proteus , Klebsiella (lent) / Salmonella, Citrobacter, Escherichia coli, Edwardsiella, Shigella, Providencia, Enterobacter, Hafnia alvei, Serratia marcescens et liquefaciens
Yersinia spp. Y.enterocolitica, Y.pseudotuberculosis / Y.pestis
Vibrionaceae / / Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio
Haemophilus influenzae biotypes : I II III IV / biotypes : V VI VII VIII
Bordetella spp. B. parapertussis(24 h), B. bronchiseptica(24 h) / B. pertussis, B. trematum, B. holmesii
Brucella spp. B. suis , B. canis (fast) B. melitensis B. abortus (plus long ou peut être négatif) /
Bartonella spp. / / Bartonella spp.
Helicobacter species H. pylori, H. heilmannii / H. cinaedi, H. fennelliae
Ureaplasma urealyticum Ureaplasma urealyticum / /
Streptococcus spp S. vestibularis (Groupe Salivarius) / Groupe Mitis, Groupe Anginosus, Groupe Mutans

Ⅴ- Limites et conseils techniques

- Le bouillon à l'urée est un milieu hautement tamponné nécessitant de grandes quantités d'ammoniac pour élever le pH au-dessus de 8,0, ce qui entraîne un changement de couleur.

- Les milieux d'urée s'ils sont exposés à la lumière peuvent développer du peroxyde, ce qui peut interférer avec le test d'uréase. L'urée est également connue pour subir une auto-hydrolyse; il est donc conseillé de conserver les milieux au réfrigérateur à 4-8°C.


Références:

  1. Public health England : Identification of Enterobacteriaceae
  2. Public health England : Urease test
  3. Biorad manuel : UREA INDOLE
  4. American society for microbiology : Urease Test Protocol
  5. ASM MicrobeLibrery
  6. M Peeters: a diagnostic tool in the management of Helicobacter pylori-related gastrointestinal diseases
  7. Senthilkumar Sankararaman; Leila Moosavi : Urea Breath Test
  8. Color Atlas of Medical Bacteriology (ASM Books) 3rd Edition