Noter l’aspect macroscopique du prélèvement : clair, trouble, purulent, hémorragique
(si injection d’eau physiologique) : jeter le surnageant,le culot servira pour examen direct et la culture
↦ À partir du prélèvement (ou à partir du culot de centrifugation), faire un frottis coloré au BM, choisir une parcelle purulente.
↦ Lecture : Numération de PNN/champ Noter la présence ou l’absence de bactéries (forme, disposition et abondance)
Culture directe : ensemencer directement le prélèvement (ou le culot de centrifugation) sur les 04 milieux : GSC, GSF, Hektoen, Chapman (2 gttes à ensemencer en râteau)
Culture après dilution :
↦ 2 gttes du prélèvement dans 1 ml d’eau physiologique stérile (= dilution au 1/10) Ensemencer 2 gttes en râteau sur GSC (dilution 10-2)
↦ Incuber les boites à 35°-37° S/ CO2 10% pour les GSC
✻ Si culture négative ↦ réincuber les boites jusqu’ 48 heures
✻ Si culture positive ↦ compter le nombre de colonies identiques dans chaque boites : culture directe et dilution.
⇶ Nombre de colonies X dilutions = nombre UFC / ml
NB: Il faut qu’il y ait une corrélation entre les cultures dans les différentes dilutions (nombre et morphotype)
✻ La culture directe sert de contrôle (même type de colonies au niveau des cultures après dilution ; l’abondance aussi doit être respectée).
✻ Elle sert aussi à repérer les contaminations lors de manipulation (culture après dilution +, culture directe -)
✻ si nombre > 10 3 UFC/ ml ↦ Identification + antibiogramme
✻ si nombre < 103 UFC ↦Numération bactérienne < 103 UFC/ ml Répondre : Numération bactérienne < 10 3 UFC/ ml (Ne pas procéder à une identification et un antibiogramme)
✻ si flore microbienne polymorphe, discuter l’éventualité d’identifier des bactéries, pathogènes dont le seuil est > 10 3 UFC/ ml.
✻ Si culture négative ↦ résultats : numérations bactéries < 10 3 UFC / ml.
✻ Si culture positive ↦ procéder Idem 2ème jour
