1er JOUR :

1. aspect macroscopique :

-purulent ou mucopurulent, hématique, salivaire …

2. examen direct :

faire un frottis (a partir du prélèvement ou du culot de centrifugation s’il est trop dilué) coloré au bleu de méthylène, lecture au microscope X 100 et :

❖ apprécier le nombre de PNN/champ

❖ Apprécier les cellules épithéliales

❖ Apprécier la flore bactérienne (uni ou polymicrobienne)

3. étape de fluidification :

❖ ajouter un volume égal de digesteur (carbocysteine)

❖ laisser à 37° pendant 30 min

❖ agiter vigoureusement (agitateur) jusqu’à liquéfaction du crachat

4. Mise en culture :

❖ culture directe :ensemencer directement le prélèvement (ou le culot de centrifugation) sur les 04 milieux : GSC, GSF, Hektoen, Chapman (2 gttes à ensemencer en râteau)

❖culture après dilution :

❯ 2 gttes du prélèvement dans 10 ml d’eau physiologique stérile (= dilution au 1/100 (10-2): Ensemencer 2 gttes en râteau sur GSC (dilution 10-3)

❯ 2 gttes (a partir de la dilution 1/100) dans 10 ml d’eau physiologique stérile (= dilution au 10-4): Ensemencer 2 gttes en râteau sur GSC (dilution 10-5)

2eme JOUR :

5. Lecture des boites:

❖ Si culture négative → réincuber les boites jusqu’a 48 H

❖ Si culture positive → comptage des colonies.

NB: il faut qu’il y ait le même type de colonies, l’abondance doit être moins importante après dilution).

6. INTERPRÉTATION :

seuil: :

❖ Crachats ≥ 107 UFC/ ml

❖ AET ≥ 106 UFC/ ml

✽ < 5 colonies → la bactérie est considérée comme commensale (Répondre : Absence de culture bactérienne significative)

✽ > 5 colonies → la bactérie est considérée comme pathogènes pour l’AET

✽ > 50 colonies → la bactérie est considérée comme pathogènes pour les crachats

3eme JOUR:

7. Lecture des boites réincubées

❖ Si culture négative → résultat négatif

❖ Si culture positive → procéder Idem 2ème jour