❖ Biopsies tissulaires, synoviales, musculaires, parties molles, fragments osseux…, sont obtenues par biopsie ou lors d’un acte chirurgical.
❖ Le prélèvement est placé dans un récipient stérile.
❖L’acheminement immédiat au laboratoire, dans l’heure qui suit la réalisation du prélèvement.
1/ Milieu de culture : GSC , gélose au sang frais ( du jour même) pour les germes anaérobies, Sabouraud, Heck, GN.
2/Hotte à flux laminaire
3/Mortier
4/Microscope optique
5/ Petit matériel :lames, pipettes de Pasteur, colorants, gants stériles, anse de platine, colorants.
6/Bouillon d’enrichissement
1er jour:
→Broyer stérilement le prélèvement dans un mortier stérile.
→Précaution d’asepsie rigoureuse et utilisation de hotte à flux laminaire.
→Le manipulateur doit porter des gants stériles.
Examen direct :
Avec un fragment de tissu, confectionner 03 frottis :
→ coloration au Bleu de méthylène : leucocytes + germes
→ Gram : germes
→ Ziehl-Nelsen ( si contexte de BK)
La mise en culture :
Un 2ème fragment servira à la culture :
→ GSC → CO2
→ GN à incuber
→ Gélose au sang frais à incuber en anaérobiose à 35°c
Sabouraud si visualisation de levures à l’examen direct. Faire un enrichissement du prélèvement (fragments restants ) dans un bouillon riche BHIB ou bouillon citraté ( flacon d’hémoculture) à incuber à 37°c.
2ème jour:
Lecture des cultures:
❖ Si culture négative → reincuber les boites
❖ Si culture positive → identification + antibiogramme.
3ème jour:
Lecture des boites réincubées
❖ Si culture négative → culture directe négative
❖ Si culture positive → identification + antibiogramme
Lecture de la culture anaérobie :
❖ si culture négative → reincuber au 5ème jour.
❖ si culture positive → identification + antibiogramme
4ème jour:
Lecture de la culture anaérobie
❖ Si culture négative → absence de bactéries anaérobies.
❖ Si culture positive → identification + antibiogramme
l’observation du bouillon d’enrichissement se fait tous les jours, si trouble → repiquage sur GSC, GN :
❖ Si culture négative → reincuber du bouillon.
❖ Si culture positive → identification + antibiogramme
le bouillon est incubé pendant une semaine, jusqu’à 15 jours pour les prélèvements ostéo-articulaire (fragment d’os, Biopsies synoviales, …)
04 semaines si recherche de Brucella.
