Test indole : Principe, procédure, résultats et interprétation

Sommaire :

• Ⅰ. Introduction
• Ⅱ. Principe
• Ⅲ. Procédure et résultats
1. Méthode conventionnelle en tube
2. Spot test
• Ⅳ. Test d'indole positif et négatif
• Ⅴ. Limites et conseils techniques

Introduction

Dès 1889, l'indole test a été utilisé comme moyen de distinguer entre Escherichia coli et Enterobacter aerogenes , le test recherche la capacité d'un organisme à dégrader le tryptophane et produire de l'indole, La production d'indole est mise en évidence par l'addition de réactif de Kovac qui agit avec l'indole en donnant une coloration rouge

Principe du test de l'indole

Le test d'indole détermine la capacité d'un organisme à produire de l'indole à partir de la dégradation de l'acide aminé tryptophane. Le tryptophane est hydrolysé par la tryptophanase pour produire trois produits possibles : l'indole, pyruvate et l'ion ammonium :

La détection de l'indole repose sur la réaction chimique entre l'indole et le réactif de Kovac (alcool isoamylique, para-Diméthylaminobenzaldéhyde, acide chlorhydrique concentré) dans des conditions acides :

1. Le para-Diméthylaminobenzaldéhyde réagit avec l'indole présent dans le milieu pour former un colorant rouge rosindole.
2. L'alcool isoamylique forme un complexe avec le colorant "rosindole", ce qui provoque sa précipitation.
3. L'alcool restant et le précipité remontent alors à la surface du milieu.

Procédure et résultats

◍ Deux méthodes sont décrites :

• Méthode en tube : la méthode conventionnelle qui identifie ,après une incubation d'une nuit, les organismes producteurs d'indole faibles.
• Spot indole test : détecte les organismes producteurs rapide d'indole

1- Méthode conventionnelle en tube

La principale exigence de milieu pour un test d'indole approprié est qu'il contienne une quantité suffisante de tryptophane (Bouillon tryptone, milieu eau peptonée exempte d'indole, milieu Urée-indole, bouillon tryptophane peptoné, milieu de motilité sulfure-indole (SIM)...).

1. Inoculer le bouillon tryptophane (ou peptone) avec l'organisme à tester et incuber à 37°C pendant 24 à 48h
2. Ajouter 0,5 ml (5 gouttes) de réactif de Kovác et agiter doucement
3. Examiner la couche supérieure de liquide après environ 1 min

◉ Résultat : Un résultat positif est indiqué par la présence d'une couleur rouge ou rouge-violet dans la couche d'alcool de surface du bouillon. Un résultat négatif apparaît en jaune. Un résultat variable peut également se produire, affichant une couleur orange en conséquence. Cela est dû à la présence de skatole, également connu sous le nom de méthyl indole ou indole méthylé, un autre produit possible de dégradation du tryptophane.

Test d'indile Positif et Négatif

2- Spot test

1. Placer plusieurs gouttes (1 -1,5 ml) de réactif Indole Spot (1% or 5% p-methylaminobenzaldehyde ou 1% p-dimethylaminocinnamaledhyde) sur un morceau de papier filtre.
2. Etaler une colonie pure isolée (à partir d'une culture de 18 à 24 heures) sur la surface saturée du papier filtre à l'aide d'une boucle stérile
3. Examiner immédiatement

Test d'indole positif et négatif

Limites et conseils techniques