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Test indole : Principe, procédure, résultats et interprétation

Sommaire :

Introduction

Dès 1889, l'indole test a été utilisé comme moyen de distinguer entre Escherichia coli et Enterobacter aerogenes , le test recherche la capacité d'un organisme à dégrader le tryptophane et produire de l'indole, La production d'indole est mise en évidence par l'addition de réactif de Kovac qui agit avec l'indole en donnant une coloration rouge



Principe du test de l'indole

Le test d'indole détermine la capacité d'un organisme à produire de l'indole à partir de la dégradation de l'acide aminé tryptophane. Le tryptophane est hydrolysé par la tryptophanase pour produire trois produits possibles : l'indole, pyruvate et l'ion ammonium :

Indole-réaction

Réaction du test d'indole

La détection de l'indole repose sur la réaction chimique entre l'indole et le réactif de Kovac (alcool isoamylique, para-Diméthylaminobenzaldéhyde, acide chlorhydrique concentré) dans des conditions acides :

  1. Le para-Diméthylaminobenzaldéhyde réagit avec l'indole présent dans le milieu pour former un colorant rouge rosindole.
  2. L'alcool isoamylique forme un complexe avec le colorant "rosindole", ce qui provoque sa précipitation.
  3. L'alcool restant et le précipité remontent alors à la surface du milieu.

Procédure et résultats

◍ Deux méthodes sont décrites :

1- Méthode conventionnelle en tube

La principale exigence de milieu pour un test d'indole approprié est qu'il contienne une quantité suffisante de tryptophane (Bouillon tryptone, milieu eau peptonée exempte d'indole, milieu Urée-indole, bouillon tryptophane peptoné, milieu de motilité sulfure-indole (SIM)...).

  1. Inoculer le bouillon tryptophane (ou peptone) avec l'organisme à tester et incuber à 37°C pendant 24 à 48h
  2. Ajouter 0,5 ml (5 gouttes) de réactif de Kovác et agiter doucement
  3. Examiner la couche supérieure de liquide après environ 1 min

◉ Résultat : Un résultat positif est indiqué par la présence d'une couleur rouge ou rouge-violet dans la couche d'alcool de surface du bouillon. Un résultat négatif apparaît en jaune. Un résultat variable peut également se produire, affichant une couleur orange en conséquence. Cela est dû à la présence de skatole, également connu sous le nom de méthyl indole ou indole méthylé, un autre produit possible de dégradation du tryptophane.


indole

Test d'indile Positif et Négatif

2- Spot test

  1. Placer plusieurs gouttes (1 -1,5 ml) de réactif Indole Spot (1% or 5% p-methylaminobenzaldehyde ou 1% p-dimethylaminocinnamaledhyde) sur un morceau de papier filtre.
  2. Etaler une colonie pure isolée (à partir d'une culture de 18 à 24 heures) sur la surface saturée du papier filtre à l'aide d'une boucle stérile
  3. Examiner immédiatement
spot-indole

Indole Spot test

◉ Résultat : Selon le réactif utilisé pour le test spot indole, les couleurs résultantes diffèrent. Si vous utilisez du p-méthylaminobenzaldéhyde, la présence d'indole est indiquée par une couleur rouge et si vous utilisez du p-diméthylaminocinnamaledhyde, une couleur bleu-vert est observée.



Test d'indole positif et négatif

◍ Bactéries indole positif et négatif (9, 10, 11)

Bactéries Indole positif Indole variable Indole négatif
Escherichia spp. Escherichia coli , Escherichia fergusonii / Escherichia albertii
Shigella spp. / Shigella boydii , Shigella dysenteriae , Shigella flexneri Shigella sonnei
Salmonella spp. / / Salmonella spp.
Klebsiella spp. K. oxytoca / Klebsiella pneumoniae
Raoultella spp. R. ornithinolytica R. planticola R. terrigena
Serratia spp. / S. odorifera biogroup 1, S. odorifera biogroup 2 S. entomophila, S. ficaria, S. fonticola, S. liquefaciens group, Serratia marcescens, S. plymuthica, S. rubidaea
Citrobacter spp. C. amalonaticus, C. farmeri, C. koseri, C. murliniae, C. braakii ,C. freundii , C. sedlakii, C. youngae C. gillenii , C. werkmanii
Edwardsiella tarda Edwardsiella tarda / /
Proteus P. hauseri , P. vulgaris / Proteus mirabilis , P. penneri
Providencia P. stuartii , P. rettgeri , P. rustigianii , P. alcalifaciens / P. heimbachae
Morganella M. morganii / /
Yersinia spp. / Y. enterocolitica Y. pestis , Y. pseudotuberculosis
Bacilles à Gram négatif non fermentaire Elizabethkingia ,Chryseobacterium , Balneatrix, Bergeyella, Empedobacter, Wautersiella, Weeksella / Acinetobacter , Moraxella, Paracoccus, Sphingobacterium, Shewanella, Rhizobium, Ochrobactrum, Psychrobacter, Sphingomonas, Pseudochrobactrum
Actinobacillus spp / / A. lignieresii, A. equuli , A. suis, A. ureae, A. hominis
Actinobacillus spp / / A. lignieresii, A. equuli , A. suis, A. ureae, A. hominis
Aggregatibacter spp / / A. actinomycetemcomitans , A. aphrophilus, A. segnis
Capnocytophaga spp / / C. ochracea , C. sputigena, C. gingivalis, C. granulosa, C. haemolytica, C. canimorsus, C. cynodegmi
Cardiobacterium spp C. hominis (faible) C. valvarum /
Chromobacterium spp / C. violaceum C. haemolyticum
Dysgonomonas spp D. hofstadii , D. mossii D. capnocytophagoides , D. gadei /
Eikenella spp / / E. corrodens
Kingella spp / / K. kingae , K. denitrificans, K. negevensis, K. oralis , K. potus
Pasteurella spp P. multocida , P. canis , P. dagmatis , P. oralis , P. stomatis / /
Streptobacillus spp / / S. moniliformis
Suttonella spp S. indologenes / /
Haemophilus influenzae Biotype I II V VII / Biotype III IV VI VIII
Actinomyces spp. / / Actinomyces spp.
Bacteroides spp. B. ovatus , B. thetaiotaomicron / B. fragilis , B. vulgatus
Fusobacterium spp. F. necrophorum , F. nucleatum F. varium F. mortiferum
Clostridium spp. C. sordellii , C. tetani C. tertium , C. septicum, C. ramosum, C. perfringens, C. innocuum, Clostridium botulinum


Limites et conseils techniques

Le test en tube est plus sensible que le Spot test .

Le réactif d'Ehrlich est un alternatif au réactif de Kovács, Ehrlich est plus sensible alors que Kovács est plus stable

Les milieux contenant du glucose ne doivent pas être utilisés pour les tests d'indole en raison de la formation de produits finaux acides qui réduisent la production d'indole.

La gélose Mueller Hinton ne doit pas non plus être utilisée pour ce test car le tryptophane est détruit lors de l'hydrolyse acide de la caséine.

Si un bouillon de peptone est utilisé à la place du bouillon de tryptophane, le lot doit être vérifié avec un contrôle positif. C'est parce qu'il existe des variétés de bouillons peptonés, et certaines ne conviennent pas à la production d'indole car elles contiennent trop peu de tryptophane.

Les organismes à tester par la méthode spot indole doivent être prélevés dans un milieu contenant du tryptophane (par exemple de la gélose au sang) et jamais dans de la gélose MacConkey car ils ont des indicateurs de pH et une pigmentation de colonies lactose-positives qui rendront l'interprétation de la réaction colorée difficile.

L'indole est un produit diffusible. Pour atténuer la diffusion de l'indole, sélectionnez une colonie bien isolée pour le test spot de l'indole.

Référence

  1. The Hardy Diagnostics-USA-2/16 : Indole Test Reagents Kovacs, DMACA, Spot test
  2. MICHAEL MILLER : Spot Indole Test: Evaluation of Four Reagents
  3. Biorad manuel : PEPTONE WATER INDOLE FREE
  4. Public health England : Identification of Enterobacteriaceae
  5. Public health England : Indole test
  6. Biorad manuel : UREA INDOLE
  7. American society for microbiology : Indole Test Protocol
  8. ASM MicrobeLibrery
  9. Color Atlas of Medical Bacteriology (ASM Books) 3rd Edition
  10. Jin-hyung Lee, Jintae Lee : Indole as an intercellular signal in microbial communities.
  11. UK Standards for Microbiology Investigations