Sommaire :
◉ Généralités
Il a été initialement formulé par Mueller et Hinton comme un milieu sans protéine pour l'isolement primaire des espèces de Neisseria. La gélose Mueller Hinton est un milieu solide standardisé recommandé pour l’étude de la sensibilité des bactéries aux agents antimicrobiens par la méthode de diffusion (méthode Kirby-Bauer) ou de dilution en gélose.
Ce milieu non supplémenté, initialement recommandé par Bauer et al, a été sélectionné par CLSI, CA-SFM et par l’EUCAST comme milieu de référence pour plusieurs raisons. Ce milieu est pauvre en sulfamides, triméthoprime et inhibiteurs de la tétracycline, et permet une croissance satisfaisante de la plupart des agents pathogènes non exigeants tout en démontrant une reproductibilité d'un lot à l'autre.
Gélose Mueller Hinton
◉ Gélose Mueller Hinton : Préparation / Composition
Suspendre les composants, poudre déshydratée, dans l'eau (38 grammes dans 1000 ml d'eau purifiée/distillée). Le milieu est bouilli pendant quelques secondes jusqu'à dissolution complète des ingrédients. Stériliser par autoclavage à une pression de 15 lb (121°C) pendant 15 minutes.
Refroidir à 47°C, bien mélanger avant de verser dans des boîtes de Pétri stériles.
Composition gélose Mueller Hinton |
|||
|---|---|---|---|
| Ingrédients | gramme/litre | ||
| Peptone | 17.5g | ||
| Extrait de viande | 2g | ||
| Amidon | 1.5g | ||
| Agar | 17g | ||
| Final pH | 7,3 +/- 0,1 | ||
Gélose Mueller Hinton deshydraté
◈ Une variété de suppléments peut être ajouté à la gélose Mueller Hinton, y compris 5 % de sang de mouton ou de cheval défibriné, 1 % de supplément de croissance et 2 % de chlorure de sodium.
◈ L'amidon est ajouté pour absorber tous les métabolites toxiques produits
◉ Procedure
◈ Une suspension standardisée de l'organisme est tamponnée sur toute la surface du milieu.
◈ Des disques de papier imprégnés de quantités spécifiques d'antibiotiques ou d'autres agents antimicrobiens sont placés sur le support surface.
◈ La boite est incubée et les zones d'inhibition autour de chaque disque sont mesurées. Détermination de la susceptibilité est faite en comparant la taille de zone obtenue aux tailles de zone dans CLSI, EUCAST
◈ Trouvez la procedure en details dans Antibiogramme par méthode de diffusion
Antibiogramme par méthode de diffusion
Pseudomonas sur Mueller–Hinton
Serratia sur Mueller–Hinton
Limites d’utilisation
Certaines bactéries peuvent ne pas se développer sur le milieu MH du fait de leurs exigences nutritionnelles. Il est alors recommandé d'utiliser un milieu approprié :
- HTM pour Haemophilus
- Mueller-Hinton additionné de 5% de sang de mouton pour Streptococcus pneumoniae et les streptocoques ß hémolytiques
- GC agar pour Neisseria gonorrhoae
Ces recommandations sont bien décrites dans les différents référentiels CLSI, CA-SFM ou EUCAST.