Les tests d’inhibition sont basés sur les propriétés inhibitrices de l’acide boronique vis-à-vis des carbapénèmases de classe A, de l’acide dipicolinique ou de l’EDTA vis-à-vis des enzymes de classe B et de la cloxacilline vis-à-vis des céphalosporinases (AmpC), ainsi que sur la propriété de la témocilline de détecter des souches productrices d’OXA-48. (98,2% des souches produisant une OXA-48 sont très résistantes à la témocilline)*
kits commercialisé par ROSCO
Composition: le kit est constitué de cartouches contenant chacune des disques de :
- Meropénème 10 µg, codé MRP10.
- Meropénème 10 µg + Phenylboronic Acid (inhibiteur de KPC et AmpC ), codé MRPBO.
- Meropénème 10 µg + Cloxacilline (inhibiteur d’AmpC), codé MRPCX .
- Meropénème 10 µg + Dipicolinic acid (inhibiteur de métallo-β-Lactamases), codé MRPDP.
- Temocilline 30 ug
Mode opératoire
- Préparer une suspension équivalente à 0,5 McFarland de l'organisme à tester à partir d'une culture fraîche et pure.
- Ensemencer une gélose Mueller Hinton à l’aide de cette suspension
- Placer un de chaque disque sur la gélose en les espaçant suffisamment pour permettre la mesure correcte des zones d'inhibition.
- Incuber à 35±1°C pendant 18±2 heures
- Mesurer et enregistrer le diamètre des zones d'inhibition. Aucune zone autour d'un disque correspond à diamètre de 9 mm.
Interprétation
Comparer la zone d'inhibition du méropénème 10 µg aux zones d'inhibition de chacun des comprimés de méropénem + inhibiteur. Si toutes les zones sont à moins de 3 mm l'une de l'autre, inscrire l'organisme comme n'exprimant pas de KPC ni une MBL.
Certains isolats présentant une CMI au méropénem ≤ 0,25 µg/ml (zone d'inhibition autour du méropénem 10 µg > 25 mm) peuvent produire des carbapénémases (metallo β-lactamases VIM-1 ou similaires) qui peuvent être difficiles à détecter avec ce kit. Pour détecter ces isolats, utiliser de l'imipénème 10µg et le méropénème 10 µg et placer un disque d'acide dipicolinique (DPA) entre les deux, à une distance de 10 mm. La synergie (zone fantôme) entre DPA et Imipenème et/ou Méropénème indique une MBL.
* https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24055766
** Ne tester que les isolats résistants à la ceftazidime. De fausses MBL peuvent être obtenues avec des isolats sensibles à la ceftazidime.
*** Dans 80% des cas OXA-48 est accompagnée d'une BLSE CTX-M. cette association de mécanisme peut être détectée en utilisant du CAZ/Clavulanate ou du Méropénème + Tazobactam.