C’est un test phénotypique qui permet la détection de l’activité carbapénèmase des bactéries à gram négatif. Il est basé sur l’inactivation in vitro du méropénème contenu dans un disque chargé à 10µg par les souches productrices de carbapénèmases
Mode opératoire
- Une suspension bactérienne de la souche à tester est préparée à partir d’une öese de 1μL de bactéries (si entérobactéries) ou de 10μL de bactéries (si P.aeruginosa) cultivées sur gélose au sang, re-suspendues dans 2 mL de TSB (Tripticase Soja Broth = bouillon tripticase soja)
- Un disque contenant 10μg de méropénème est ensuite ajouté dans la suspension bactérienne qui est incubée pendant 4h ± 15 min à 35°C.
- Une gélose Müeller-Hinton est ensemencée à l’aide d’une suspension à 0,5 McF d’E.coli ATCC 29522.
- Le disque de méropénème est ensuite retiré de la suspension TSB à l’aide d’une öese de 10μL et déposé sur la gélose MH qui est incubée 18 à 24h à 35°C± 2°C.
- Après incubation, le diamètre d’inhibition autour du disque est mesuré.
Lecture et interprétation du test
1-Carbapénémase (+)
- Diamètre d’inhibition de 6-15 mm ou présence de colonies localisées dans un diamètre de 16-18 mm.
- Si la souche bactérienne produit une carbapénèmase, le méropénème contenu dans le disque va être inactivé, permettant la pousse de la souche indicatrice d’E.coli ATCC 29522 autour du disque.
2- Carbapénémase (-)
- Diamètre d’inhibition ≥ 19mm (zone claire)
- Si la souche bactérienne ne produit pas de carbapénèmase, le méropénème n’est pas dégradé et une zone d’inhibition franche est visible autour du disque.
3- Carbapénémase indéterminée
- Diamètre d’inhibition de 16-18 mm
- Diamètre d’inhibition ≥ 19mm avec la présence de colonies localisées dans la zone d’inhibition.
Performances
- Cette méthode a démontré une sensibilité > 99% et une spécificité > 99% pour la détection de KPC, NDM, VIM, IMI, SPM, SME et les carbapénémases de type OXA parmi les isolats d’entérobactéries étudiés par le CLSI.
- Cette méthode a démontré une sensibilité > 97% et une spécificité de 100% pour la détection de KPC, NDM, VIM, IMI, SPM et les carbapénémases de type OXA parmi les isolats de P. aeruginosa étudiés par le CLSI.
La réalisation de ce test sur Acinetobacter spp a montré une faible spécificité et une faible reproductibilité entre les laboratoires. De ce fait, ce test n’est pas standardisé par le CLSI sur Acinetobacter spp.
