Test de Coombs Direct : Principe, Indications, Procédure et Interprétation

◉ Introduction

◉ Indications

Les principales indications du test de Coombs direct sont les suivantes :

• Anémies hémolytiques auto-immunes (AHAI) : représentent la principale indication du test de Coombs direct, où il est positif dans 90 % des cas d'AHAI. Ce test permet de détecter les auto-anticorps fixés aux globules rouges du patient. L'utilisation de réactifs de Coombs monospécifiques peut également aider à différencier entre l'anémie hémolytique à anticorps chauds (IgG+ et C3+) et la maladie des agglutinines froides (IgG- et C3+).
• Anémies hémolytiques des nouveau-nés : Il permet la détection des anticorps maternels présents sur les globules rouges du nouveau-né.
• Accidents transfusionnels : Il permet de détecter si le receveur possède des anticorps dirigés contre les antigènes présents sur les globules rouges transfusés, ou si des anticorps se forment en réponse à la transfusion.
• Diagnostic de l'anémie hémolytique immunitaire d'origine médicamenteuse.

◉ Principe

Les globules rouges humains normaux peuvent devenir sensibilisés en présence d'anticorps dirigés contre un antigène qu'ils possèdent, mais ils ne s'agglutineront pas en raison de la nature spécifique de l'antigène et de l'anticorps impliqués.

Le test d'antiglobuline directe détecte les érythrocytes qui ont été sensibilisés par des anticorps (igG) et/ou du complément (C3d) in vivo, c'est-à-dire dans l'organisme du patient.

Le test de Coombs direct repose sur le principe de l'agglutination. Lorsque les globules rouges sont recouverts d'anticorps, de fragments de complément ou les deux, l'ajout d'anti-globuline humaine (AHG, également appelée réactif de Coombs) provoque une agglutination. Les cellules non sensibilisées ne seront pas agglutinées.

◉ Matériel nécessaire

Le matériel nécessaire comprend :

• EDTA : L'EDTA est le type d'anticoagulant préféré pour le test. Il chélate les ions Ca++ et Mg++ empêchant la liaison in vitro du complément aux globules rouges qui peut être médiée par des anticorps naturellement présents
• Solution saline à 0,9% de NaCl : Utilisée pour le lavage des globules rouges.
• Matériel général de laboratoire : Comprend des tubes à essai, des pipettes, une centrifugeuse, entre autres équipements nécessaires pour réaliser le test.
• Réactif de Coombs : Aussi connu sous le nom d'antiglobuline de Coombs ou d'antiglobuline humaine. Il est utilisé pour détecter la présence d'anticorps liés aux globules rouges dans le test.
• Cellules de contrôle positif (recouvertes d'IgG) : Utilisées pour valider la réaction du test et garantir sa fiabilité.

Le test peut également être effectué avec un gel dans un tube, ce qui est plus pratique et plus sensible.

◉ Réactif de Coombs

Le réactif de Coombs, également connu sous le nom d'antiglobuline humaine (AHG), est produit en immunisant des animaux, généralement des lapins, avec de la globuline humaine purifiée. Les animaux produisent ensuite des anticorps dirigés contre les immunoglobulines humaines et les composants du système du complément.

Avant utilisation, l'AHG est purifié pour éliminer les contaminants. Il est ensuite utilisé dans les tests de Coombs directs et indirects pour détecter les anticorps fixés sur les globules rouges.

Les réactifs d'AHG peuvent être:

• Polyspécifiques, contenant des anticorps dirigés à la fois contre l'immunoglobuline G (IgG) et les composants du complément (C3d).
• Monospécifiques, contenant un seul composant, tel qu'un anticorps anti-IgG ou anti-C3d.

Les réactifs AHG spécifiques à l'IgA ou à l'IgM ou d'autres fractions du complément ne sont pas couramment disponibles dans la plupart des laboratoires cliniques, mais peuvent être utilisés dans les laboratoires de référence pour le dépistage des cas difficiles à diagnostiquer.

◉ Procedure

Voici une procédure générale pour réaliser un test de Coombs direct :

• Prélever un échantillon de sang du patient dans un tube contenant de l'EDTA.
• Centrifuger le tube pour séparer le plasma des globules rouges.
• Laver les globules rouges trois fois avec une solution saline isotonique pour éliminer les contaminants.
• Après le dernier lavage, décanter complètement le surnageant.
• Prélever 50 microlitres de suspension cellulaire du patient dans un nouveau tube à essai.
• Ajouter 2 gouttes d'Anti-Human Globulin (AHG) à la suspension cellulaire du patient dans le tube à essai.
• Mélanger soigneusement et centrifuger le mélange à une vitesse de 1 500 tr/min pendant 1 minute.
• Secouer doucement le tube et examiner à l'œil nu et au microscope pour détecter l'agglutination.
• Si une agglutination est observée, le résultat est considéré comme positif, indiquant la présence d'anticorps sur les globules rouges.

Si le résultat du test est négatif, pour valider le résultat, ajouter une goutte de cellules témoins (contrôle positif), bien mélanger et centrifuger le mélange à 1 500 tr/min pendant 1 minute et rechercher une agglutination. Si aucune agglutination n'est observée, le résultat n'est pas valide.

En pratique, on commence par utiliser le réactif polyspécifique capable de détecter à la fois les IgG et le C3 ; puis, en cas de résultat positif, un test monospécifique est réalisé par la suite pour caractériser plus précisément l'anticorps.

◉ Test de Coombs direct Positif

Le test de Coombs direct peut être positif dans les situations suivantes :

• Anémie hémolytique auto-immune (AIHA) : Dans l'AIHA, les anticorps produits par le système immunitaire attaquent les propres globules rouges de l'organisme, entraînant leur destruction et une anémie.
• Maladie hémolytique du fœtus et du nouveau-né (MHFNN) : les anticorps maternels attaquent les globules rouges du fœtus.
• Réaction immunitaire post-transfusionnelle : Un test de Coombs direct positif peut survenir après une transfusion sanguine si le receveur développe une réaction immunitaire contre les antigènes présents sur les globules rouges du donneur.
• Anémie hémolytique d'origine médicamenteuse.
• Les patients atteints de leucémie lymphoïde chronique (LLC), bien que ce ne soit pas le cas pour tous les patients.
• Certaines infections : Mycoplasme, VIH.
• Il existe des cas où une agglutination des érythrocytes peut être observée chez les personnes âgées sans présence de maladies connues pouvant entraîner une agglutination. De plus, certains médicaments peuvent influencer la formation d'agglutinats érythrocytaires.

◉ Test de Coombs direct Négatif

Un test de Coombs direct négatif signifie qu'aucun anticorps ou complément n'a été détecté à la surface des globules rouges par les réactifs de coombs.

Dans certains cas, même en présence d'une hémolyse à médiation auto-immune, le résultat du test à l'antiglobuline peut être négatif. Cela est connu sous le nom d'anémie hémolytique auto-immune de Coombs négative.

Si une anémie hémolytique auto-immune est suspectée malgré un résultat négatif au test de Coombs direct, des tests quantitatifs plus sensibles sont nécessaires pour évaluer la quantité d'IgG sur les globules rouges.

◉ Conclusion

En résumé, le test de Coombs direct peut être positif dans diverses situations telles que l'anémie hémolytique auto-immune ou les réactions immunitaires post-transfusionnelles. Cependant, un résultat négatif ne peut pas exclure complètement ces conditions. Une interprétation précise nécessite une évaluation approfondie des symptômes du patient et de ses antécédents médicaux.