Haemophilus Influenzae : Classification, Identification, Infection et Résistance

◉ Classification / Nomenclature

H. influenzae est une espèce classée dans le genre Haemophilus (renferme 16 espèces) au sein de la famille des Pasteurellaceae

◉ Épidémiologie

Haemophilus spp. habitent normalement les voies respiratoires supérieures des humains. Colonisation asymptomatique à H. influenzae de type b est rare. Parmi H. influenzae, il existe deux grandes catégories : typables et non typables (NTHi).

Les souches sont typées en fonction de leurs caractéristiques capsulaires. La capsule est composée d'un complexe sucre-alcool phosphate (c'est-à-dire polyribitol phosphate). Les différences dans ce complexe constituent la base de la séparation des souches encapsulées en l'un des six groupes suivants : type a, b, c, d, e ou f. H. influenzae de type b (Hib) est le plus souvent rencontré dans les infections graves chez l'homme.

Les souches non typables ne produisent pas de capsule et sont le plus souvent rencontrées en tant qu'habitants normaux des voies respiratoires supérieures.

Bien que la transmission de personne à personne joue un rôle clé dans les infections causées par Haemophilus influenzae, les infections causées par d'autres souches et espèces d'Haemophilus surviennent probablement de manière endogène lorsque la propre flore d'une personne accède à un site. normalement stérile.

L'organisme colonisateur envahit la muqueuse et pénètre dans la circulation sanguine du patient. Les souches encapsulées sont protégées de l'élimination des phagocytes de l'hôte. Une fois dans la circulation, l'organisme est capable de se propager à d'autres sites et tissus, notamment les poumons, le péricarde, la plèvre et les méninges.

◉ Pathogénèse

H. influenzae ne produit aucune exotoxine. L'organisme non encapsulé est un membre régulier du microbiote respiratoire normal de l'homme. La capsule est antiphagocytaire en l'absence d'anticorps anticapsulaires spécifiques.

La capsule de polyribose phosphate de type b H. influenzae est le principal facteur de virulence. Le taux de porteurs dans les voies respiratoires supérieures pour H. influenzae de type b était de 2 à 4 % avant la vaccination et est aujourd'hui inférieur à 1 %. Le taux de porteur pour les H. non typables. influenzae est de 50 à 80 % ou plus. Tapez b H. influenzae provoque une méningite, une pneumonie et un empyème, une épiglottite, une cellulite, une arthrite septique et, occasionnellement, d'autres formes d'infection invasive.

Bien que le type B puisse provoquer une bronchite chronique, une otite moyenne, une sinusite et une conjonctivite, il le fait beaucoup moins fréquemment que H. influenzae non typable. Le sang de nombreuses personnes âgées de plus de 3 à 5 ans est bactéricide contre H. influenzae, et les infections cliniques sont moins fréquentes chez ces personnes. Cependant, les anticorps bactéricides sont absents chez 25 % des adultes aux États-Unis, et des infections cliniques sont survenues chez des adultes.

◉ Maladies

H. influenzae était autrefois la principale cause de méningite chez les jeunes enfants, mais l'utilisation du vaccin « conjugué » très efficace a considérablement réduit l'incidence de la méningite causée par cet organisme.

C'est toujours une cause importante d'infections des voies respiratoires supérieures (otite moyenne, sinusite, conjonctivite et épiglottite) et de septicémie chez les enfants. Il provoque également une pneumonie chez les adultes, en particulier chez ceux atteints d'une maladie pulmonaire obstructive chronique.

◉ Morphologie et identification

◉ A. Organismes typiques

Dans les échantillons provenant d'infections aiguës, les organismes sont des bacilles coccoïdes courts (1,5 μm), se présentant parfois en paires ou en chaînes courtes.

En culture, la morphologie dépend à la fois de la durée d'incubation et du milieu. A 6-8 heures en milieu riche, les petites formes cocco-bacillaires prédominent. On trouve ensuite des bâtonnets plus longs, des bactéries lysées et des formes très pléomorphes.

Les organismes en jeunes cultures (6-18 heures) sur milieu enrichi possèdent une capsule bien définie. La capsule est l'antigène utilisé pour « typer » H. influenzae.

◉ B. Culture

Sur gélose au chocolat, des colonies plates, brun grisâtre, d'un diamètre de 1 à 2 mm, sont présentes après 24 heures d'incubation. IsoVitaleX dans les médias améliore la croissance. H. influenzae ne se développe pas sur gélose au sang de mouton sauf autour des colonies de staphylocoques (« phénomène satellite »).

◉ C. Caractéristiques de croissance

L'identification des organismes du groupe Haemophilus dépend en partie de la démonstration du besoin de certains facteurs de croissance appelés X et V. Le facteur X agit physiologiquement comme l'hémine ; le facteur V peut être remplacé par le nicotinamide adénine nucléotide (NAD) ou d'autres coenzymes. Les colonies de staphylocoques sur gélose au sang de mouton provoquent la libération de NAD, donnant lieu au phénomène de croissance satellite. Les glucides fermentent mal et irrégulièrement.

En plus du sérotypage sur la base des polysaccharides capsulaires, H. influenzae et H parainfluenzae peuvent être biotypés sur la base de la production d'indole, d'ornithine décarboxylase et d'uréase. La plupart des infections invasives causées par H. influenzae appartiennent aux biotypes I et II (il y en a au total huit).

◉ Tests de diagnostic en laboratoire

◉ A. Echantillons

Les échantillons sont constitués d'expectorations et d'autres types d'échantillons respiratoires, de pus, de sang et de liquide céphalo-rachidien pour frottis et cultures, en fonction de la source de l'infection.

◉ B. Identification directe

Des kits commerciaux sont disponibles pour la détection immunologique des antigènes de H. influenzae dans le liquide céphalo-rachidien. Un résultat de test positif indique que le liquide contient de fortes concentrations de polysaccharide spécifique de H. influenzae de type b. Ces tests de détection d'antigènes ne sont généralement pas plus sensibles qu'une coloration de Gram et ne sont donc pas largement utilisés, notamment en raison de la faible incidence de la méningite à H. influenzae.

◉ C. Culture

Les spécimens sont cultivés sur une gélose au chocolat enrichie en IsoVitaleX jusqu'à l'apparition de colonies typiques. H. influenzae se différencie des bacilles Gram-négatifs apparentés par ses besoins en facteurs X et V et par son absence d'hémolyse sur gélose au sang.

Les tests pour les besoins en facteurs X (hème) et V (nicotinamide-adénine dinucléotide) peuvent être effectués de plusieurs manières. Les espèces d'Haemophilus qui nécessitent le facteur V se développent autour de bandes de papier ou de disques contenant du facteur V placés à la surface d'une gélose qui a été autoclavée avant l'ajout du sang (le facteur V est thermolabile).

Alternativement, une bandelette contenant le facteur X peut être placée en parallèle avec une bandelette contenant le facteur V sur une gélose déficiente en ces nutriments. La croissance d'Haemophilus dans la zone située entre les bandes indique la nécessité des deux facteurs. Un meilleur test pour l'exigence du facteur X est basé sur l'incapacité de H. influenzae (et quelques autres espèces d'Haemophilus) pour synthétiser l'hème à partir de l'acide δ-aminolévulinique.

L'inoculum est incubé avec l'acide δ-aminolévulinique. Les organismes Haemophilus qui ne nécessitent pas de facteur X synthétisent du porphobilinogène, des porphyrines, de la protoporphyrine IX et de l'hème. La présence d'une fluorescence rouge sous la lumière ultraviolette (~ 360 nm) indique la présence de porphyrines et un résultat de test positif.

◉ Tests et thérapie de sensibilité aux antimicrobiens

◉ 1- Résistance intrinsèque

Haemophilus influenzae présente une résistance intrinsèque à certains antibiotiques, tels que les macrolides à cycle de 16 atomes, les lincosamides, la bacitracine, le mécillinam, l'oxacilline et les glycopeptides. Il présente une sensibilité modérée aux macrolides à anneaux de 14 et 15 atomes (par exemple, l'érythromycine), aux streptogramines et aux céphalosporines de première génération (par exemple, la céfalotine).

◉ 1- Résistance acquise

La résistance aux ß-lactamines résulte souvent de la production de bêta-lactamase (type TEM), mais elle peut également résulter de mutations dans les protéines liant la pénicilline (PBP), réduisant ainsi l'efficacité des antibiotiques. L'utilisation d'inhibiteurs de bêta-lactamase peut restaurer leur activité.

La résistance acquise peut également affecter les tétracyclines, les phénicols, les fluoroquinolones et le triméthoprime-sulfaméthoxazole, bien que l'incidence soit généralement très faible.

Note : Des précautions doivent être prises lors de la préparation des concentrations d'inoculum (0,5 McFarland) pour Haemophilus spp. ; en particulier, les souches productrices de bêtalactamase de H. influenzae, car des suspensions plus élevées peuvent conduire à des résultats faussement résistants.