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🏾 Définition
L'HEPES est un agent tampon à usage général largement utilisé en biochimie et en biologie moléculaire pour maintenir le pH physiologique (plage pH 6,8-8,2).
C'est un composé organique zwitterionique, il a tendance à capter ou à céder des ions H+ selon la valeur du pH de la solution aqueuse où ils se trouvent. Le zwitterion est à l'équilibre avec le cation et l'anion correspondant.
Le tampon HEPES est classé dans la catégorie des tampons "Good", qui dérivent d'un ensemble de tampons décrits par le Dr Norman Good et al. (Good et al., Biochimie 1966).
Tampon Hepes
Hepes, acide libre |
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| Numéro CAS | 7365-45-9 | ||||||||
| Masse moléculaire | 238.30 g/Mol | ||||||||
| Formule | C8H18N2O4S | ||||||||
| Synonymes | Acide N-2-hydroxyéthylpipérazine-N'-2-éthanesulfonique, acide N-(2-hydroxyéthyl)pipérazine-N'-(2-éthanesulfonique) | ||||||||
Sel de sodium HEPES |
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| Numéro CAS | 75277-39-3 | ||||||||
| Masse moléculaire | 260.29 g/Mol | ||||||||
| Formule | C8H17N2O4SNa | ||||||||
| Synonymes | sodium;2-[4-(2-hydroxyéthyl)pipérazin-1-yl]éthanesulfonate | ||||||||
🏾 Applications et utilisations du tampon HEPES
Un tampon est une solution qui contient un acide et une base ou un sel. Son objectif principal est de maintenir la concentration d'ions hydrogène à un niveau idéal pour des objectifs spécifiques, tels qu'une culture bactérienne. Tout comme les autres types de tampons chimiques, le tampon HEPES maintient la concentration en ions d'une solution à un niveau idéal ( = niveau de pH idéal) pour un certain usage. Plus précisément, le tampon HEPES est utilisé pour maintenir les conditions idéales pour la culture cellulaire
- L'HEPES est utilisé dans de nombreux milieux car il a un pouvoir tampon supérieur à celui du bicarbonate de sodium à pH physiologique (7,2 - 7,4) à 37°C. Le bicarbonate de sodium est nutritionnellement nécessaire pour la plupart des cellules, donc HEPES doit être ajouté en plus, et non à la place, du bicarbonate de sodium. Il est généralement ajouté à des concentrations de 10 à 25 mM (des niveaux plus élevés peuvent provoquer une cytotoxicité).
- L'HEPES n'a pas la capacité de former un complexe significatif avec la plupart des ions métalliques et il est recommandé de l'utiliser comme tampon non coordinant dans les solutions avec des ions métalliques.
- L'HEPES est avantageusement utilisé dans la culture tissulaire. Les craintes que l'HEPES puisse servir de source de nutriments pour les bactéries aérobies se sont avérées non fondées.
- HEPES est recommandé pour la protection des solutions congelées d'enzymes contre les changements de pH induits par la congélation. Il est également utile dans la phosphorylation oxydative, la synthèse des protéines avec des systèmes bactériens acellulaires, la photophosphorylation, la fixation du CO2
- Dans les études TEM (microscopie électronique à transmission), l'HEPES n'affecte pas les substrats métalliques. Il s'agit d'un tampon recommandé pour le test de liaison au glutamate, qui empêche la liaison aux matériaux non récepteurs.
🏾 Propriétés
HEPES est un tampon à usage général. Il est soluble dans l'eau, n'interfère pas avec les processus biologiques ou les membranes biologiques (pénétration, solubilisation, adsorption en surface, etc.), a une tendance connue à former des complexes avec les ions métalliques, est non toxique et a une très faible valeur U.V. absorption à une longueur d'onde > 260 nm.
La poudre HEPES résiste aux températures élevées avec son point de fusion atteignant 200 ℃, ainsi, elle ne se dégradera pas par autoclavage, ou vous pouvez filtrer les solutions tampons HEPES à l'aide d'un filtre à seringue de 0,2 micromètre.
La solution aqueuse d'HEPES doit être conservée à l'abri de la lumière. l'exposition à la lumière ambiante pendant trois heures, cela produirait du peroxyde d'hydrogène cytotoxique