Contenu :
Gélose MacConkey: Principe, Préparation et Interpretation
Ⅰ. Généralités
La gélose MacConkey est un milieu de culture solide, sélectif et différentiel, spécifiquement conçu pour favoriser la croissance des bactéries Gram-négatives. De plus, elle permet de mieux distinguer les organismes Gram-négatifs en évaluant leur capacité à métaboliser le lactose:
- Bactéries fermentatrices de lactose, les colonies deviennent rouges ou roses sur gélose MacConkey
- Les non-fermenteurs ne changent pas de couleur.
Le taux de croissance, la vitesse de fermentation du lactose et la présence ou non d'une capsule sont également des moyens de différencier davantage les organismes dans le milieu Macconkey.
Gélose MacConkey
Ⅱ. Préparation / Composition de la gélose Macconkey
Suspendre les composants, poudre déshydratée, dans l'eau (49.53 grammes dans 1000 ml d'eau purifiée/distillée). Le milieu est bouilli pendant quelques secondes jusqu'à dissolution complète des ingrédients. Stériliser par autoclavage à une pression de 15 lb (121°C) pendant 15 minutes.
Refroidir à 47°C, bien mélanger avant de verser dans des boîtes de Pétri stériles.
Composition gélose MacConkey |
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|---|---|---|---|
| Ingrédients | gramme/litre | Ingrédients | gramme/litre |
| Peptone (Digestion pancréatique de gélatine) | 17g | Rouge neutre | 30 mg |
| Protéose peptone (viande et caséine) | 3g | Violet de cristal | 1 mg |
| Lactose monohydraté | 10g | Gélose | 13.5 g |
| Sels biliaires | 1.5g | Eau distillée | 1 litre |
| Chlorure de sodium | 5 g | pH Final | 7.1 +/- 0.2 |
Gélose MacConkey deshydraté
◈ Le lactose dans le milieu peut être remplacé par d'autres sucres : MacConkey au sorbitol.
◈ Une variante de la gélose MacConkey sans cristal violet ni sel peut être utilisée pour limiter l'essaimage de Proteus spp.
Ⅲ. Principe et interpretation
◈ La gélose MacConkey est un milieu sélectif et différentiel utilisé pour l'isolement et la différenciation de bacilles à Gram négatif non exigeants, en particulier les membres de la famille des entérobactéries et du genre Pseudomonas.
◈ La sélectivité :Le colorant violet cristal et les sels biliaires arrêtent la croissance des bactéries gram-positives. Cela permet uniquement aux espèces gram-négatives, qui ont une membrane externe relativement résistante à la bile, de former des colonies sur gélose MacConkey
◈ La différenciation : Les bactéries Gram-négatives qui poussent sur MacConkey se différencient par leur capacité à fermenter le lactose.
- Les bactéries qui fermentent le lactose font diminuer le pH du milieu, cette diminution est détecté par le rouge neutre, qui est de couleur rouge à des pH inférieurs à 6,8. Lorsque le pH baisse, le rouge neutre est absorbé par les bactéries, qui apparaissent sous forme de colonies rose vif à rouge sur la gélose : Escherichia coli, Enterobacteria, Klebsiella
- Les bactéries à Gram négatif qui se développent sur la gélose MacConkey mais ne fermentent pas le lactose apparaissent incolores sur le milieu et la gélose entourant les bactéries reste relativement transparente : Salmonella, Proteus, Yersinia, Pseudomonas
Fermentation du lactose (A) vs non fermentation du lactose (B)
Les colonies de Klebsiella sur MacConkey sont souvent mucoïdes, grandes (4 à 6 mm) et rose foncé à pâle (@lab.elm)
Les colonies d'Escherichia coli sur gélose MacConkey sont roses à rose foncé, sèches et en forme de beignet et sont entourées d'une zone rose foncé de sels biliaires précipités.
Note:
⚡ Les bactéries Gram-positives ne formeront aucune colonie sur le milieu MacConkey (avec quelques exception).
⚡ Les bactéries à forte fermentation du lactose produisent suffisamment d'acide pour provoquer la précipitation des sels biliaires, ce qui entraîne un halo rose dans le milieu entourant les colonies individuelles ou les zones de croissance confluente.
⚡ Les fermenteurs faibles du lactose formeront des colonies plus lentement que les autres. Exemple: Serratia, Citrobacter
⚡ Les fermenteurs lents du lactose peuvent apparaître sous forme de colonies incolores. Exemple: Enterobacter (Plus de details )
⚡ Les bactéries encapsulées produisent des capsules en utilisant du lactose. Cela donne des colonies collantes d'apparence humide. Exemple: Klebsiella, Enterobacter
Souche muqueuse de Klebsiella sur gélose MacConkey (@microbiology-cluj)
Enterobacter spp., à gauche, sont souvent des fermenteurs tardifs du lactose, et ainsi les colonies peuvent apparaître incolores à rose clair.(1)
Ⅳ. Variants du milieu Macconkey
1. MacConkey au sorbitol (Sorbitol-containing MacConkey agar (SMAC))
- Ce milieu utilise du D-sorbitol plutôt que du lactose pour isoler et différencier les sérotypes entéropathogènes d'E. coli qui ont tendance à être négatifs au sorbitol.
- E. coli O157:H7 (EHEC) est sorbitol négatif et les colonies apparaissent incolores , tandis que d'autres souches d'E. coli fermentent le sorbitol et apparaissent sous forme de colonies roses avec une sensibilité de 100 % et une spécificité de 85 %.
MacConkey au sorbitol - à gauche une E. coli O157:H7 sorbitol négatif (source : Color Atlas of Medical Bacteriology 4ed)
2. MacConkey sans cristal violet ni sel
Le chlorure de sodium est supprimé du milieu pour fournir un milieu déficient en électrolytes empêchant Proteus spp de se propager. De plus, ce milieu ne contient pas de cristal violet permettant la croissance de Staphylococcus, Enterococcus et Mycobacterium spp.
◉ Questions fréquemment posées
Q: Pourquoi la gélose MacConkey est-elle utilisée pour la culture d'urine?
A : La gélose Macconkey permet de sélectionner et de différencier directement à partir d'un échantillon d'urine les bâtonnets à Gram négatif, qui regroupent la plupart des bactéries responsables des infections urinaires
Q: Est-ce que Salmonella pousse sur MacConkey?
A: Oui, les salmonelles peuvent se développer sur MacConkey, les salmonelles n'utilisent pas de lactose (colonies incolores).
Q: Comment E. coli apparaît-il sur la gélose MacConkey?
A: E coli va, en fermentant le lactose, abaisser le pH et changer la couleur du rose au rose foncé
Q: Est-ce que Shigella pousse sur MacConkey?
A: Oui, Shigella peut pousser sur MacConkey, Shigella n'utilise pas de lactose (colonies incolores).
Q: MacConkey est-il sélectif ou différentiel?
A : La gélose MacConkey est sélective et différentielle
Q: Qu'est-ce qui rend la gélose MacConkey sélective?
A: Le colorant cristal violet et les sels biliaires stoppent la croissance des bactéries à Gram positif.