- Placer une goutte (25µl) d'une solution de Nigrosine à 7% ou d'encre de Chine près d'une extrémité d'une lame bien nettoyée (selon le spécimen, parfois l'encre de Chine doit être diluée avec de l'eau distillée)
- Retirez une petite quantité de culture à l’aide d’une boucle d’inoculation et dispersez-la dans la goutte de colorant sans étaler la goutte.
- Prenez une autre lame de verre microscopique, placez-la près du mélange échantillon-colorant à un angle d'environ 30 ° - 45 °
- Déplacez la lame vers la goutte du mélange échantillon-colorant jusqu'à ce que le contact soit établi avec la goutte à l'angle spécifique. Ensuite, déplacez la lame doucement et rapidement vers l'avant sur la lame d'échantillon, en attirant le mélange de colorants derrière elle en un film mince.
- Laisser le frottis sécher à l'air, puis observer au microscope sur des objectifs à haute puissance (45X) et à immersion dans l'huile (100X).
- La coloration négative colore toute la préparation SAUF les éléments que tu veux observer, Le but principal de la coloration négative est d'étudier la forme morphologique, la taille et la disposition des cellules bactériennes difficiles à colorer ou trop délicats pour être fixés à la chaleur
La coloration négative est la seule technique de coloration dans laquelle les cellules bactériennes ne sont pas colorées mais elles sont rendues visibles sur un fond sombre sous forme de corps incolores.
Ⅰ. Principe de la coloration négative
☰ La nécessite un colorant acide tel que l'encre de Chine ou la Nigrosine
La coloration négative est une coloration acide. Cela signifie que le colorant cède facilement un ion hydrogène (proton) et le chromophore du colorant devient chargé négativement. Étant donné que la surface de la plupart des cellules bactériennes est chargée négativement, la surface cellulaire repousse le colorant. Les bactéries apparaîtront sous forme de points clairs sur un fond sombre.
Levures rondes encapsulées
Ⅱ. Procédure de la coloration négative
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Ⅱ. Quelques exemples
Coloration negative bacillus (A: forme végétative B: Endospore)
Coloration negative staphylococccus
Coloration negative C.neoformans