Technique de Concentration de Ritchie
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◉ Introduction
La technique de Ritchie est une méthode physico-chimique utilisée pour la concentration des parasites dans les échantillons de selles. Cette technique est particulièrement utile pour détecter les parasites présents en faible nombre en augmentant leur concentration dans un plus petit volume de selles, ce qui facilite leur observation au microscope.
C'est une méthode diphasique qui repose sur l'utilisation de deux phases non miscibles : une phase hydrophile (aqueuse) et une phase lipophile. Les parasites, en raison de leur nature physique et chimique, tendent à se concentrer dans le culot après centrifugation. Cette technique exploite le coefficient de partage des parasites entre ces deux phases pour les isoler efficacement.
Depuis son introduction par Ritchie en 1948, la méthode a été modifiée par de nombreux chercheurs pour améliorer son efficacité et sa facilité d'utilisation. Actuellement, c'est l'une des méthodes les plus utilisées en laboratoire de parasitologie.
◉ Indications et Contre-indications
- Indications : Cette technique est indiquée pour concentrer les kystes de protozoaires et les œufs d'Ascaris et de schistosomes.
- Contre-indications : Elle est contre-indiquée pour les formes végétatives des parasites.
◉ Mode Opératoire de la Technique de Ritchie
◉ Préparation de la solution fécale
- Diluer une noisette de selles dans dix fois son volume de solution de formol à 10%.
- Laisser décanter pendant une minute pour éliminer les gros débris (il est déconseillé d'utiliser un tamis ou une gaze, car ils retiennent les éléments parasitaires).
◉ Mélange avec l'éther
- Dans un tube conique à centrifuger, mettre 2/3 du volume de la solution fécale et ajouter 1/3 de volume d'éther.
- Boucher le tube à l'aide d'un bouchon de caoutchouc et mélanger énergiquement pendant une minute jusqu'à obtenir une homogénéité des deux phases.
◉ Centrifugation
- Centrifuger pendant 3 minutes à 1500 tours/minute.
◉ Séparation des phases
Après centrifugation, on observe de haut en bas les phases suivantes :
- Une phase éthérée chargée de graisses.
- Une phase épaisse (gros débris).
- Une phase aqueuse.
- Le culot où sont concentrés éventuellement les parasites.
◉ Élimination des phases supérieures
- Éliminer énergiquement les trois premières phases en ne gardant que le culot. À l'aide d'une pipette Pasteur, prélever une à deux gouttes du culot et les déposer entre lame et lamelle.
◉ Identification et équilibrage des tubes
- Identifier les tubes coniques à centrifuger au moyen d'une étiquette ou d'un feutre spécial.
- S'assurer que les rotors de la centrifugeuse sont équilibrés, surtout si l'on centrifuge un nombre impair de tubes.
◉ Lecture au microscope
- Prendre une goutte du culot après homogénéisation, à l'aide d'une pipette Pasteur.
- La recherche des œufs d'helminthes se fait au grossissement x10.
- La recherche des kystes et des oocystes se fait au grossissement x40 et x100.
◉ Précautions d'Usage avec l'Éther
- Inflammabilité et Explosion : L'éther est une substance extrêmement inflammable et/ou explosive lorsqu'elle est en contact avec une flamme nue ou une étincelle.
- Stockage : Les récipients contenant de l'éther, une fois ouverts, doivent être conservés dans un endroit bien ventilé et frais dans le laboratoire.
- Volatilité : L'éther étant très volatil, les récipients doivent être bien fermés et hermétiques.
- Réfrigération : Un récipient contenant de l'éther ne doit JAMAIS être placé dans un réfrigérateur. Les vapeurs d'éther peuvent s'accumuler et tout peut exploser à l'ouverture du réfrigérateur (étincelle de la lumière du réfrigérateur).
- Placement : Les récipients en cours d'utilisation ne doivent jamais être placés ensemble dans une armoire. Éviter de stocker de grandes quantités d'éther dans le laboratoire.