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◉ Introduction
Le frottis sanguin est un examen microscopique où une goutte de sang est étalée sur une lame de verre puis colorée afin de permettre d'observer et étudier les différentes cellules sanguines.
Il permet d'analyser les formes, les nombres, les tailles, les contenus et les stades de maturité des cellules sanguines, notamment les globules rouges, les globules blancs et les plaquettes.
C'est un outil hématologique essentiel et très informatif utilisé par les cliniciens pour le dépistage, le diagnostic et le suivi de l'évolution de certaines maladies ainsi que de la réponse thérapeutique.
◉ Indications
Les indications de frottis sanguin :
- Résultats anormaux provenant d'un comptage automatisé (NFS)
- Évaluation de la réponse thérapeutique dans les hémopathies.
- Ictère ou hémolyse inexpliquée.
- Suspicion de maladie myéloproliférative chronique ou aiguë, comme la leucémie myéloïde chronique.
- Suspicion de maladies lymphoprolifératives.
- Certaines infections parasitaires telles que le paludisme, la maladie de Lyme (borréliose) et les filarioses.
- Cytopénie inexpliquée : anémie, leucopénie ou thrombocytopénie
- Anémie nutritionnelle due à des carences en vitamine B12, en folate ou en fer.
- Leucocytose, lymphocytose ou monocytose inexpliquée
- Dans le cadre d'un examen de santé général.
◉ Fair un Frottis Sanguin
Le frottis sanguin est préparé par du personnel de laboratoire qualifié ou par un appareil automatisé de frottis sanguins.
- Rassembler le matériel nécessaire.
- Préparation du frottis sanguin.
- Fixation du frottis sanguin.
- Coloration du frottis sanguin.
◉ 1. Matériel Nécessaire
- Gants
- Sang total en tube héparine ou EDTA (l'anticoagulant de choix)
- Tubes capillaires ou micropipette.
- Lames de microscope
- Un mouchoir ou une serviette en papier
◉ 2. Préparation du Frottis Sanguin
- Étiqueter le bord givré avec le nom du patient, le numéro d'identification et la date.
- Retournez doucement le tube pour mélanger l'échantillon.
- Remplir un tube capillaire aux trois quarts avec l'échantillon anticoagulé.
- Placer une goutte de sang, d'environ 2 mm - 4 mm de diamètre, à environ un 1 cm de la zone givrée de la lame.
- Placer la lame sur une surface plane et tenir le côté étroit du bord non givré entre votre pouce et votre index gauche.
- Avec votre main droite, placer le bord lisse et propre d'une deuxième lame (étaleur) sur la lame d'échantillon, juste devant la goutte de sang.
- Laisser le sang se répandre presque jusqu'aux bords de la lame.
- Pousser l'étalement vers l'avant d'un mouvement léger, fluide et continu. Un mince film de sang en forme de balle avec un bord effiloché restera sur la lame.
◉ 3. Fixation du frottis sanguin
- Laisser le film de sang sécher à l'air complètement (10 à 20 minutes) avant de le colorer.
- Ne pas souffler pour sécher. L'humidité de votre souffle provoquera des artefacts de globules rouges.
- un séchage rapide est déconseillé car il surétale les leucocytes et rend la distinction entre les grands lymphocytes et les monocytes difficile.
- Le frottis séché est fixé avec du méthanol absolu ou de l'alcool éthylique
◉ 4. Coloration du frottis sanguin.
Différents types de colorants sont utilisés pour colorer les frottis sanguins, parmi lesquels le Leishman et le Giemsa sont les plus couramment utilisés en hématologie.
- Le Leishman contient du méthanol pour stabiliser les composants cellulaires, tandis que le Giemsa n'en contient pas.
- L'absence de méthanol dans le Giemsa permet aux globules rouges de se décomposer à travers le colorant, facilitant ainsi l'identification des composants tels que le paludisme.
Note: Deux lames ou plus doivent être réalisées par échantillon et la qualité de la lame doit être évaluée immédiatement. Les lames de mauvaise qualité doivent être jetées et de nouvelles en être produites.
◉ Examiner un Frottis Sanguin
◉ 1. Globules rouges
Les GR normaux sont des disques biconcaves d'environ 7 à 8 µm de diamètre, avec une pâleur centrale et aucun inclusions intra-cytoplasmiques. Les globules rouges sont de couleur rose.....acommmmppllletter
Des variations anormales dans la taille, la forme, la couleur des cellules, la présence d'inclusions intracellulaires et la disposition pathologique des cellules suggèrent une foule d'anomalies.
Espace accru entre les globules rouges
1.1 Variations anormales dans la taille des GR
Un globule rouge de taille normale (normocyte) est comparable à la taille du noyau d'un petit lymphocyte.
- Une taille de globule rouge réduite est appelée microcyte et se traduit dans le FNS par une Volume Globulaire Moyen (VGM) inférieure à la normale.
- Une taille de globule rouge augmentée est appelée macrocyte et se traduit dans le FNS par une VGM supérieure à la normale.
- Une variation de taille des globules rouges (grands et petits) est appelée anisocytose et se traduit dans le FNS par une Indice de Distribution des Globules Rouges (IDR) augmentée.
1.2 Variations anormales dans la forme des GR
1.3 Couleur des GR (teneur relative en hémoglobine)
La couleur des globules rouges est reflétée par leur teneur en hémoglobine. Une hémoglobinisation accrue est appelée hyperchromie. Une diminution de l'hémoglobinisation est une hypochromie.
1.4 Inclusions érythrocytaires
Les inclusions dans les GR peuvent résulter de divers facteurs tels que la maturation défectueuse des érythrocytes, des lésions oxydatives ou des infections.
Les corps de Howell-Jolly, les ponctuations basophiles et les granules sidérocytiques sont des exemples d'inclusions qui peuvent être observées sur les frottis sanguins.
1.5 Formations particuliers
La detection de rouleaux de GR, l'agglutination et l'érythrophagocytose ou espace accru entre les globules rouges peuvent être observées dans certaines conditions pathologiques, fournissant des indications diagnostiques supplémentaires.
◉ 2. Globules blancs
Comme pour les érythrocytes, le nombre et la morphologie de chaque type de leucocytes sont évalués sur le frottis périphérique.
permet l'évaluation de la distribution et de la morphologie des globules blancs. C'est l'une des procédures les plus précieuses utilisées lors de l'examen du sang. L'étude de la morphologie des globules blancs et de leur répartition constitue un élément essentiel de la description clinique de pratiquement toutes les maladies.
2.1 Polynucléaires Neutrophiles (PNN)
Les PNN sont des cellules rondes mesurant 12 à 14 μm de diamètre, avec un noyau plurilobé (3 à 5 lobes) reliés par des filaments nucléaires. Le cytoplasme contient de nombreuses granulations fines, beige rosé, appeler granulations azurophiles.
Les "band cells" sont des PNN à noyau non segmenté ( segmentation incomplète) en forme de C ou S et une chromatine moins dense. Dans un sang normal, il existe environ 5 % de « band cells » l'élévation de leur pourcentage fait évoquer un syndrome infectieux ou inflammatoire.
Le frottis sanguin permet de détecter différentes anomalies des polynucléaires neutrophiles, notamment au niveau du noyau et du cytoplasme :
- Noyau : Anomalie de Pelger-Huet, Hypersegmentation
- Cytoplasme : Hypogranulation, Granules toxiques, Vacuolisation.
2.2 Lymphocytes
Les lymphocytes sont de petites cellules d'environ 9 à 12 μm de diamètre, caractérisées par un noyau violacé mesurant environ 7 à 8 μm de diamètre. Ce noyau renferme des amas denses de chromatine sans présence de nucléoles, tandis que le cytoplasme, bien délimité, est de petite taille, basophile et clair.
Il existe des formes de lymphocytes dites atypiques, caractérisées par des variations dans le volume cellulaire, la coloration du cytoplasme, le type de granulation et la couleur du cytoplasme, entre autres. Ces variations sont souvent observées en cas d'infection virale, comme le virus d'Epstein-Barr (EBV), ou en cas d'affection néoplasique.
2.3 Eosinophiles
Les éosinophiles sont légèrement plus gros que les polymorphes et le noyau est généralement bilobé. Leur caractéristique déterminante est la présence de granules rouge orangé dans le cytoplasme. Une éosinophilie importante peut être observée dans les allergies et les infections parasitaires
2.3 Basophiles
Les basophiles (10 à 14 μm) sont des cellules sanguines caractérisées par leur forme ronde à légèrement ovale. Leur noyau présente généralement 2 à 4 segments en forme de S ou de U, avec une chromatine dense et une granulation superposée.
Leur granulation est grossière, dense et d'une teinte violet-noir foncé, avec une forme et une taille légèrement variables et une répartition irrégulière sur la cellule. Le cytoplasme des basophiles est de couleur bleu-rose pâle.
2.3 Monocytes
Les monocytes, étant les plus grandes cellules du sang, présentent une forme légèrement ovale avec un contour souvent irrégulier. Leur noyau est légèrement allongé, généralement réniforme ou en fer à cheval, et souvent lobé.
La chromatine du noyau est caractérisée par une structure irrégulière et fine, donnant une apparence "spongieuse". Leur cytoplasme est de couleur gris pâle et basophile, souvent agrémenté de vacuoles fréquentes et volumineuses. Leur granulation est fine et généralement dispersée de manière homogène sur le cytoplasme.
◉ 3. Plaquettes
Elles se présentent sous forme d'éléments arrondis ou discoïdes de petite taille, de 1 à 3 μm de diamètre, à contours irréguliers, de coloration gris clair, parsemés de fines granulations rosées.
- la recherche d'agrégats sur frottis de sang prélevé sur anticoagulant pour détecter les pseudothrombopénies à l'EDTA ou au citrate ;
- l'analyse de la taille et des anomalies des grains pouvant faire évoquer une thrombopathie constitutionnelle ou acquise.
◉ Conclusion
En conclusion, le frottis sanguin demeure un outil fondamental et polyvalent en hématologie, permettant une évaluation détaillée des différentes composantes cellulaires du sang.
De la collecte de l'échantillon à la coloration du frottis, chaque étape est cruciale pour garantir des résultats précis et informatifs.
C'est un pilier essentiel dans la pratique médicale, contribuant au dépistage, au diagnostic et à la surveillance de nombreuses conditions médicales, notamment les troubles hématologiques et infectieux.