Coloration de Gram et Acinetobacter
La coloration de Gram en phase logarithmique (phase exponentielle), les Acinetobacter apparaissent sous la forme de petits coccobacilles à Gram négatif, mesurant 1,0 à 1,5 µm sur 1,5 à 2,5 µm, seuls ou par paires. Leur morphologie est très similaire à celle de Neisseria spp.(Différencier facilement par text d'oxydase ) , mais deviennent généralement plus coccoïdes en phase stationnaire. Comme ils sont difficiles à décolorer, ils peuvent être identifiés à tort comme des cocci à Gram variable ou à Gram positif “staphylocoque-like”
Bien que cela soit rare, les patients atteints d'infections graves peuvent ne pas recevoir de traitement approprié dans de tels cas si les antibiotiques sont réduits en fonction de la coloration de Gram seule
Acinetobacter apparaissant sous forme de cocci à Gram positif.
Astuces pour différencier l'Acinetobacter
❶ Différenciation biochimiques par TSI
- Une fois que les cocci Gram-positifs ovales et/ou géants sont visualisés sur la coloration Gram préliminaire, ajouter quelques gouttes du matériel de culture dans TSI-Agar et répétez la coloration de Gram après 2-4 h d'incubation à 37 ° C.
- Acinetobacter ne fermentent pas le glucose, et sont strictement aérobies, ils ne changeront donc pas la couleur du milieu TSI , contrairement, par exemple, à Staphylococcus qui effectue une fermentation acide.
❷ Stimulation de la phase exponentielle
Pour mieux apprécier la coloration bactérienne, il est conseillé de mettre des colonies dans un bouillon nutritif et l'incuber dans un bain-marie pendant 30min à 1 heure .
❸ Test à la potasse 'KOH'
- Le test de l'hydroxyde de potassium 'KOH' peut être utilisé comme test de confirmation pour la coloration de Gram La formation d'une chaîne (ADN) dans 3% de KOH indique que l'isolat est un organisme Gram négatif ( Les parois cellulaires à Gram négatif sont décomposées par 3% de KOH et libèrent à leur tour un matériau chromosomique viscoïde qui fait que la suspension devient épaisse et filandreuse.)
- 1- une goutte de 3% KOH sur une lame microscopique.
- 2- transférer une quantité généreuse de bactéries (cultivées pendant 24-48 h) à la goutte de KOH Remuer soigneusement
- 3-La solution de bactéries à Gram négatif sera visqueuse et formera une chaîne mucoïde dans les 30 secondes
KOH test positif
Références:
- European Society of Clinical Microbiology and Infectious Diseases : Acinetobacter ursingii masquerading as Gram-positive cocci
- The Open Microbiology Journal ; Misinterpretation of Gram Stain from the Stationary Growth Phase
- ASM journals
- IPA