Gélose PCA | Principe | Préparation | Interpretation
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Ⅰ. Généralités
La gélose PCA (Plate Count Agar) est un milieu recommandé pour le dénombrement standardisé des bactéries aérobies dans l’eau, les produits laitiers et les aliments, les produits cosmétiques ou pharmaceutiques.
Le milieu PCA est non sélectif et relativement riche en nutriments, la tryptone, les facteurs vitaminiques de l'extrait de levure et le glucose utilisé comme source énergétique favorisent la croissance de la plupart des bactéries.
Ce milieu, également appelé Tryptone Glucose Yeast Agar ou Casein-Peptone Dextrose Yeast Agar, est conforme aux spécifications données par l' American Public Health Association et ISO 4833.
Gélose PCA
Ⅱ. Préparation / Composition
Suspendre les composants, poudre déshydratée, dans l'eau ( 23.5 dans 1000 ml d'eau purifiée/distillée). Le milieu est bouilli pendant quelques secondes jusqu'à dissolution complète des ingrédients.
Stériliser à l'autoclave à 121°C pendant 15 minutes. Couler en boîtes de Petri stériles et laisser solidifier sur une surface plane
Composition gélose PCA |
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|---|---|---|---|
| Ingrédients | gramme/litre | ||
| Tryptone | 5g | ||
| Extrait de levure | 2.5g | ||
| Glucose | 1g | ||
| Agar agar bactériologique | 12g | ||
| pH | à 25 °C : 7,0 ± 0,2. | ||
◈ En bactériologie laitière, il est recommandé d’ajouter 1 g de lait écrémé en poudre par litre de milieu reconstitué
Ⅲ. Principe et usage
La quantité de bactéries est exprimée en unités formant colonies par gramme (UFC/g), dans les échantillons solides et par ml (UFC/ml) dans les échantillons liquides. Cette valeur peut être déterminée par plusieurs techniques :
Ensemencement en profondeur ou Standard Methods Agar (PCA)
- Transférer 1 mL de l’inoculum et de ses dilutions décimales successives dans des boîtes de Petri stériles.
- Couler environ 15 mL de milieu ramené à 44-47 °C, par boîte.
- Homogénéiser parfaitement et laisser solidifier sur une surface froide.
- Incuber à 30 ± 1 °C pendant 72 ± 3 heures.
REMARQUE: Si la présence de colonies envahissant la surface de la gélose est suspectée, il est possible de couler une seconde couche de gélose, après reprise de la première masse (environ 4 mL).
Ensemencement en surface
- Faire sécher les boîtes à l’étuve couvercle entrouvert.
- A la surface du milieu, transférer 0,1 mL de l’échantillon à analyser et de ses dilutions décimales successives.
- Ensemencer l’inoculum en surface à l’aide d’un étaleur stérile.
- Incuber à 30 ± 1 °C pendant 72 ± 3 heures.
Ⅳ. Lecture / Interpretation
◈ Incubez:
- à 30°C pendant 72 heures pour la recherche des microorganismes mésophiles.
- à 55°C pour les microorganismes thermophiles.
- à 6,5°C pour les microorganismes psychrotrophes pendant 10
Après incubation, compter les colonies sur les boîtes comportant entre 10 et 300 colonies. Lors du calcul du nombre réel de bactéries dans l'échantillon, le facteur de dilution doit être pris en compte.
Lorsqu'elles sont cultivées sur gélose PCA additionné de lait, les bactéries caséolytiques forment un halo plus clair autour de chaque colonie (protéolyse de la caséine du lait)
| Organismes | Croissance |
|---|---|
| Staphylococcus aureus | Bonne croissance, productivité PR ≥ 0.70 |
| Escherichia coli | Bonne croissance, productivité PR ≥ 0.70 |
| Bacillus subtilis | Bonne croissance, productivité PR ≥ 0.70 |
Références:
- Standard Methods for the Examination of Dairy Products
- FDA - Aerobic Plate Count
- FDA - Plate Count Agar (Standard Methods)
- Handbook of Culture Media for Food Microbiology, J.E.L. Corry et al : Hektoen Enteric (HE) agar 2003
- Indicia fiche technique : Gélose PCA
- Pierre-Yves Guillaume - GELOSE POUR DENOMBREMENT PCA
- Biokar - GELOSE POUR DENOMBREMENT (PCA
- neogen - Plate Count Agar (Standard Methods)
