Bouillon au thioglycolate | Principe | Préparation | Interpretation
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Ⅰ. Généralités
Le bouillon au thioglycolate est un milieu à usage général pour la culture d'anaérobies, de microaérophiles et d'aérobies, et est recommandé comme l'un des milieux pour les tests de stérilité des produits biologiques.
Il agit comme un bouillon d'enrichissement qui peut contenir ou non un indicateur d'oxydation, la résazurine, très utilisé en bactériologie diagnostique.
Ce milieu ne nécessite pas de contenant anaérobie ni de scellement spécial pour la culture des anaérobies. Le thioglycolate de sodium dans le milieu consomme de l'oxygène et permet la croissance d'anaérobies obligatoires
Bouillon au thioglycolate
Ⅱ. Préparation / Composition
Suspendre les composants, poudre déshydratée, dans l'eau (29g dans 1000 ml d'eau purifiée/distillée). Porter à ébullition et dissoudre complètement le milieu.
Répartir dans des tubes à essai et stériliser en autoclave à 121°C pendant 15 minutes.
Composition bouillon au thioglycolate |
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|---|---|---|---|
| Ingrédients | gramme/litre | ||
| Tryptone | 15,0 g/L | ||
| L-Cystine | 0,5 g/L | ||
| Glucose | 5,5g | ||
| Extrait de levure | 5,0g | ||
| Chlorure de sodium | 2.5g | ||
| Thioglycolate de sodium | 0,5g | ||
| Résazurine | 0,001g | ||
| Gélose | 0,75g | ||
Les versions enrichies de ce milieu contiennent également de la vitamine K1 et de l'hémine.
Ⅲ. Principe
Trois ingrédients principaux contribuent au maintien de la semi-anaérobiose du milieu : le thioglycolate de sodium, la cystine et la gélose.
- Le thioglycolate de sodium et la L-cystine abaissent le potentiel d'oxydoréduction du milieu en éliminant l'oxygène pour maintenir un Eh bas. Le thioglycolate sert également à inactiver les composés mercuriels et prévient également l'accumulation de peroxydes qui peuvent être létaux pour certains micro-organismes..
- La présence de 0,05% d'agar aide à maintenir un environnement anaérobie en empêchant la dispersion et l'échappement du CO2 généré par le métabolisme bactérien et la diffusion de l'oxygène, de l'environnement,
La concentration en oxygène à un niveau donné est indiquée par un colorant sensible au redox tel que la résazurine qui devient rose en présence d'oxygène.
Glucose, tryptone, extrait de levure, L-cystine apportent les facteurs de croissance nécessaires à la multiplication bactérienne.
Ⅴ. Lecture / Interpretation
◈ Pas de turbidité : pas de croissance
◈ Turbidité : croissance (présence d'organismes)
1 : Les aérobies obligatoires ont besoin d'oxygène car ils ne peuvent pas fermenter ou respirer de manière anaérobie. Ils se rassemblent au sommet du tube où la concentration en oxygène est la plus élevée.
2 : Les anaérobies obligatoires sont empoisonnés par l'oxygène, ils se rassemblent donc au fond du tube où la concentration en oxygène est la plus faible.
3 : Les anaérobies facultatifs peuvent se développer avec ou sans oxygène car ils peuvent métaboliser l'énergie de manière aérobie ou anaérobie. Ils se rassemblent principalement au sommet car la respiration aérobie génère plus d'ATP que la fermentation ou la respiration anaérobie.
4 : Les microaérophiles ont besoin d'oxygène car ils ne peuvent pas fermenter ou respirer de manière anaérobie. Cependant, ils sont empoisonnés par de fortes concentrations d'oxygène. Ils se rassemblent dans la partie supérieure du tube à essai, mais pas tout en haut.
5 : Les organismes aérotolérants n'ont pas besoin d'oxygène car ils métabolisent l'énergie de manière anaérobie. Contrairement aux anaérobies obligatoires, cependant, ils ne sont pas empoisonnés par l'oxygène. Ils peuvent être trouvés uniformément répartis dans le tube à essai.