Ⅰ. Généralités
C'est milieu pour l'isolement de Shigella et de Salmonella, il a été développé, à l'origine, par King et Metzger (1968) de l'Institut Hektoen.
Il repose sur l'utilisation de sels biliaires pour l'inhibition sélective et de
deux systèmes indicateurs (système indicateur de pH) :
- Le bleu de bromothymol et la fuchsine acide comme indicateurs de la dissimilation des glucides (lactose, saccharose, salicine)
- Le fer ferrique comme indicateur de la formation d'hydrogène sulfuré (H2S) à partir de thiosulfate.
La gélose Hektoen est un milieu différentiel modérément
sélectif servant à l’isolement et à la culture de microorganismes entériques à Gram négatif, en
particulier à l’isolement des espèces Shigella et Salmonella issues d’échantillons fécaux (flore mixte) .
Gélose Hektoen (@gueroviagero)
Ⅱ. Préparation / Composition
Suspendre les composants, poudre déshydratée, dans l'eau (72,66 grammes dans 1000 ml d'eau purifiée/distillée). Le milieu est bouilli pendant quelques secondes jusqu'à dissolution complète des ingrédients.
Ne pas autoclaver ou surchauffer.
Refroidir à 47°C et verser dans des boîtes de Pétri. Le pH final doit être de 7,5 + 0,2.
Composition gélose Hektoen |
| Ingrédients |
gramme/litre |
Ingrédients |
gramme/litre |
| Protéose peptone |
12g |
Extrait de levure |
3g |
| Chlorure de sodium |
5g |
Sels biliaires |
9g |
| Citrate de fer ammoniacal |
1,5g |
Salicine |
2g |
| Lactose |
12g |
Saccharose |
12g |
| Fuchsine acide |
0,1g |
Bleu de bromothymol |
0,065g |
| Gélose |
14g |
pH final |
7,5 ± 0,2 |
Gélose Hektoen
◈ Hoben et al ont ajouté 15 mg/litre de novobiocine pour améliorer la sélectivité du milieu en inhibant les espèces Citrobacter et Proteus.
Ⅲ. Principe
La gélose Hektoen est un milieu sélectif et différentiel pour l'isolement et la différenciation des agents pathogènes à partir d'échantillons cliniques.
◈ La sélectivité : La présence de sels biliaires et de colorants inhibe la plupart des organismes à Gram positif, ce qui permet uniquement aux bacilles à Gram négatif de se développer sur la gélose.
La forte concentration de sels biliaires inhibe partiellement ou totalement la plupart de la flore coliforme non pathogène du tractus intestinal. Étant donné que Salmonella et Shigella peuvent tolérer ces substances inhibitrices, ils se développent généralement plus rapidement et plus gros que les coliformes.
◈ La différenciation :
La fermentation des glucides tels que le lactose, le saccharose et la salicine est
l'une des caractéristiques différenciatrices utilisées pour identifier les coliformes.
Le bleu de bromothymol qui vire au jaune en présence d’acide et la fuchsine qui se colore en rouge en présence d’aldéhyde.
Salmonella et Shigella sont incapables d'utiliser
ces trois glucides spécifiques (colonies translucides, vert clair ou bleu verdâtre),
alors que la plupart des coliformes non pathogènes peuvent en utiliser au moins un (colonies de couleur orange, jaune ou saumon).
Une différenciation supplémentaire reposant sur la production d’hydrogène sulfuré est possible grâce à la présence de thiosulfate de sodium et de citrate de fer.
Elle se traduit par des colonies noir ou à centre noir, coloration due à la formation de sulfure de fer .
Gélose Hektoen
NB :
- Les sels biliaires peuvent précipiter hors du milieu et apparaître comme une zone trouble autour des colonies.
- La teneur élevée en peptone compense l'effet inhibiteur des sels biliaires sur les espèces de Shigella en particulie
Ⅳ. Lecture / Interpretation
◈ Après 24 heures à 37°C en aérobiose, en général :
La fermentation d'au moins un des sucres se traduit par une coloration "saumon / jaune / orange" des colonies. L'absence de fermentation se
traduit par une coloration bleue ou verte des colonies. La production d’hydrogène sulfuré (H2S) est caractérisée par des colonies noir ou à centre noir.
| Organismes |
Croissance |
| E. coli |
Grande taille, de couleur jaune à saumon, inhibition possible de
certaines souches |
| Enterobacter/Klebsiella |
Grande taille, de couleur jaune à saumon |
| Proteus |
Taille variable, de couleur bleu-vert à bleue ou saumon, la plupart
des souches étant de couleur noire au centre ou sur toute leur
surface |
| Salmonella |
De couleur bleu-vert à bleue, la plupart des souches étant de
couleur noire au centre ou sur toute leur surface .Tous les sérotypes de Salmonella ont cet aspect sur gélose HE à l'exception du sérotype Typhi, qui est un faible producteur de H2S, et de rares souches de Salmonella fermentant le lactose. |
| Shigella |
Couleur verte, humides et convexes |
| Pseudomonas |
Irrégulières, de couleur verte à marron |
| Bactéries Gram positives |
Croissance nulle à faible |
Shigella. Les colonies sont transparentes, indiquant l'absence d'utilisation de glucides et aucune production de H2S (@CERTEST)
Aeromonas hydrophila pousse bien sur la gélose Hektoen, produisant des colonies jaunes car elle fait fermenter le saccharose (9).
Souche fermentant la salicine de Proteus vulgaris (50% des souches sont positives). L
es colonies sont plus jaunes qu'oranges et plus plates qu'Enterobacter aerogenes. Il n'y a
pas de précipitation des sels biliaires par cet organisme (2).
E.coli sur Gélose Hektoen