Contenu :
Milieux de transport Amies | Principe | Préparation
Ⅰ. Généralités
Le milieu de transport Amies est un milieu semi-solide conçu pour la collecte, le transport et la conservation d'échantillons cliniques en analyses microbiologiques. Sa formulation permet de :
- Maintenir la viabilité des micro-organismes sans favoriser leur croissance.
- Préserver l'intégrité des échantillons pour un stockage à court terme (24h) ou long terme (congélation).
Historique :
Développé en 1954 par Stuart et al., le milieu Amies est une amélioration du milieu Stuart, avec :
- Un remplacement du glycérophosphate par un tampon phosphate inorganique.
- L'ajout de charbon de bois (optionnel) pour augmenter la survie des bactéries exigeantes (ex : Neisseria gonorrhoeae).
Milieu Amies
Ⅱ. Composition
Suspendre les composants, poudre déshydratée, dans l'eau (20g dans 1000 ml d'eau purifiée/distillée). Porter à ébullition et dissoudre complètement le milieu.
Répartir dans de petites bouteilles à bouchon vissé, en remuant pendant ce temps pour maintenir le charbon en suspension homogène. stériliser en autoclave à 121°C pendant 15 minutes.
Retourner les bouteilles pendant le refroidissement pour répartir uniformément le charbon . Conserver dans un endroit frais.
Composition milieu Amies |
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|---|---|---|---|
| Ingrédients | gramme/litre | Ingrédients | gramme/litre |
| Chlorure de sodium | 3 g | Chlorure de Magnésium | 0,1g |
| Chlorure de Potassium. | 0,2g | Phosphate monopotassique | 0,2 g |
| Phosphate disodique | 1.15 g | Gélose | 4,0g |
| Chlorure de Calcium | 0,1g | Eau déminéralisée | 1000.0ml |
| Thioglycolate de sodium | 1,0 | Charbon (facultatif) | 10,0 g |
Ⅲ. Protocole de Préparation :
- Dissolution : Suspendre 20 g de poudre déshydratée dans 1 L d’eau distillée. Porter à ébullition pour homogénéiser.
- Répartition : Verser dans des flacons à bouchon vissé en agitant pour maintenir le charbon en suspension.
- Stérilisation : Autoclave à 121°C pendant 15 minutes.
- Refroidissement : Retourner les flacons pour une répartition uniforme du charbon. Conserver au frais.
Ⅳ. Principe
Le milieu Amies agit via :
- Un environnement réducteur (thioglycolate de sodium) : Inhibe l'oxydation et les enzymes autolytiques.
- Un pH stable (tampon phosphate) : Maintient des conditions physiologiques.
- Une texture semi-solide (gélose à 0,4%) : Limite la diffusion d’oxygène et la multiplication bactérienne.
- Charbon de bois (optionnel) : Absorbe les métabolites toxiques pour les bactéries fragiles.
Ⅴ. Mode d'emploi
- Prélèvement : Ensemencer un écouvillon stérile avec l’échantillon clinique.
- Insertion : Placer l’écouvillon dans le tiers supérieur du milieu.
- Fermeture : Casser la tige et visser le bouchon hermétiquement.
- Transport :
- Envoyer au laboratoire sous 24h (conservation à 2–8°C si délai).
- Pour stockage prolongé, congeler à –20°C ou –80°C.
Ⅵ. Avantages et Applications
- Polyvalence : Adapté aux bactéries aérobies, anaérobies et fastidieuses.
- Conformité : Respecte les normes CLSI et ISO pour le transport d’échantillons.
- Utilisations courantes : Prélèvements ORL, génitaux (dépistage de N. gonorrhoeae), plaies, etc.