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La gélose VRBL est un milieu sélectif pour l’isolement et la numération des coliformes dans l’eau, le lait et les autres produits laitiers, le matériel de laiterie et autres denrées alimentaires.
Le milieu VRBL repose sur l'utilisation simultanée de cristal violet et de sels biliaires pour inhiber les bactéries Gram-positives et le rouge neutre comme indicateur de PhVRBL === Violet Red Bile Agar with Lactose
Gélose VRBL
Suspendre les composants, poudre déshydratée, dans l'eau (39,5 grammes dans 1000 ml d'eau purifiée/distillée). Le milieu est bouilli pendant quelques secondes jusqu'à dissolution complète des ingrédients. Ne pas autoclaver ou surchauffer.
Refroidir à 47°C et verser dans des boîtes de Pétri. Le pH final doit être de 7,5 + 0,2.
Composition gélose VRBL |
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Ingrédients | gramme/litre | ||
peptone | 7,00g | ||
Chlorure de sodium | 5g | ||
Extrait de levure | 3g | ||
Rouge neutre | 0.03g | ||
Sels biliaires | 1.5g | ||
Cristal violet | 0,002g | ||
Lactose | 10g | ||
Gélose | 15,00g |
S'il y a culture cela veut dire que le micro-organisme est résistant aux agents sélectifs, le cristal violet et les sels biliaires, on peut donc supposer que la souche est un bacille gram négatif.
Les microorganismes qui fermentent rapidement le lactose, donnent des colonies pourpres entourées d’un halo pourpre (dans le cas d'une forte acidification liée à l'utilisation du lactose). Les microorganismes qui ne fermentent pas le lactose ou tardivement, donnent des colonies pâles avec des zones verdâtres.
◈ Les coliformes sont généralement définis par leur capacité à fermenter rapidement le lactose, produisant de l'acide et du gaz, généralement en 24 heures. Les genres dont on s'attend généralement à ce qu'ils appartiennent à ce groupe comprennent Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter et Escherichia, en particulier Escherichia coli. Cependant, des espèces appartenant à d'autres genres, par exemple Erwinia et Serratia , peuvent également fermenter le lactose, bien que lentement, et certaines souches de Citrobacter et Klebsiella , ainsi que Salmonella arizonae et Hafnia alvei , présentent une capacité de fermentation retardée ou variable.
Organismes | Croissance |
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E. coli | bonne croissance, colonies roses à pourpre avec halo. |
Staphylococcus aureus | pas de croissance |
Enterococcus faecalis | pas de croissance |
Pseudomonas aeruginosa | Colonies beige-rose. |