Gélose MRS (deMan, Rogosa, Sharpe) | Principe | Préparation | Interpretation

Ⅰ. Généralités

Ⅱ. Préparation / Composition

Suspendre les composants, poudre déshydratée, dans l'eau (70g dans 1000 ml d'eau purifiée/distillée). Porter le milieu à ébullition sous agitation constante pendant au moins 1 minute.
Stériliser à l'autoclave à 121°C pendant 15 minutes, refroidir à 45-50°C. Ajuster le pH de manière aseptique avant de verser.

◈ La gélose MRS peut être modifiée (pH acide, pH acide + acide sorbique, pH neutre) et/ou additionnée de différents suppléments selon la flore recherchée (l’acétate de thallium, l’acétate de sodium, l’acide sorbique, l’acide acétique, le nitrate de sodium, le cycloheximide et la polymyxine.).

Ⅲ. Principe de la gélose MRS

La nutrition est assurée par un mélange de peptones , de glucose, d'extraits de boeuf et de levure

Le polysorbate 80 apporte les acides gras nécessaires à la métabolisme des lactobacilles.

La sélectivité contre les streptocoques et les moisissures est assurée par le citrate d'ammonium et l'acétate de sodium. Utilisé à faible pH, le citrate d'ammonium permet la croissance des lactobacilles tout en inhibant un certain nombre d'autres groupes de micro-organismes.

Le sulfate de magnésium et le sulfate de manganèse fournissent des ions essentiels à la multiplication des lactobacilles.

Les phosphates assurent une bonne action tampon dans le milieu.

Ⅳ. Utilisation

Mettre 1 ml d’échantillon dilué dans des boîtes de Pétri stériles, et ajouter la gélose MRS (15 - 20 mL) fondue à 45°C, puis mélanger soigneusement

Après solidification, ajouter dans les 15 minutes, une nouvelle couche de gélose MRS (15 mL), non ensemencée, à la surface et laisser solidifier. Il est important d’avoir une atmosphère humide adéquate au-dessus de la gélose, afin qu’elle ne sèche pas lors de l’incubation (ceci concentrerait les facteurs sélectifs en surface et rendrait le milieu inhibiteur).

Incuber 3 jours à 25°C ou 2 jours à 37°C, selon le type de flore recherchée, sous atmosphère enrichie de 5% de CO2.

Ⅴ. Lecture / Interpretation

◈ Les lactobacilles apparaissent sous forme de grandes colonies blanches incrustées dans ou sur de la gélose MRS. En raison de la possibilité de développement de germes autres que les bactéries lactiques, il peut être nécessaire, dans certains cas, de vérifier au microscope qu’il s’agit bien de bacilles à Gram positif, non sporulés.