Gélose EMB | Principe | Préparation | Interpretation
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Ⅰ. Généralités
La gélose éosine au bleu de méthylène (EMB) est un milieu sélectif et différentiel utilisé pour l'isolement des bacilles gram négatifs dans les aliments, les produits laitiers et les échantillons cliniques.
La gélose EMB a été initialement formulée en 1916 par Holt-Harris et Teague, puis, la gélose a été modifiée par Levine en 1918 qui a retiré le saccharose de la formule et augmenté la teneur en lactose.
De nos jours, la gélose EMB est une combinaison entre la formulation décrite par Holt-Harris et Teague et Levine.
E.coli sur gélose EMB
Ⅱ. Préparation / Composition
Suspendre les composants, poudre déshydratée, dans l'eau (36 grammes dans 1000 ml d'eau purifiée/distillée). Le milieu est bouilli pendant quelques secondes jusqu'à dissolution complète des ingrédients. Stériliser à l'autoclave à une pression de 15 lb (121 °c) pendant 15 minutes. éviter la surchauffe.
Refroidir à 45-50°C et agiter le milieu pour oxyder le bleu de méthylène (c'est-à-dire lui redonner sa couleur bleue) et mettre en suspension le précipité floculant. Verser dans des boîtes de Pétri.
Composition gélose EMB |
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|---|---|---|---|
| Ingrédients | Gramme/litre | ||
| Digeste peptique de tissu animal | 10 000 | ||
| Phosphate dipotassique | 2.000 | ||
| Lactose | 5 000 | ||
| Sucrose | 5 000 | ||
| Éosine – Y | 0,400 | ||
| Bleu de méthylène | 0.065 | ||
| Gélose | 13.500 | ||
Ⅲ. Principe
La gélose EMB contient deux colorants, l'éosine et le bleu de méthylène qui inhibent la croissance de nombreux microorganismes Gram-positifs qui l'accompagnent. Ces colorants servent d'indicateurs différentiels en réponse à la fermentation des glucides.
- Les bactéries gram-négatives fermentant le lactose acidifient le milieu et, dans des conditions acides, les colorants produisent un complexe violet foncé qui est généralement associé à un éclat métallique vert. Cet éclat vert métallique est un indicateur de la capacité vigoureuse de fermentation du lactose et/ou du saccharose typique des coliformes fécaux.
- Une plus petite quantité de production d'acide, qui est le résultat d'une fermentation lente (par des organismes à fermentation lente du lactose), donne une coloration brun-rose de la croissance.
- Les non-fermenteurs de lactose, tels que Shigella et Salmonella, forment des colonies transparentes, incolores ou ambrées qui se distinguent facilement des coliformes.
Le lactose et le saccharose sont les sources d'énergie en étant des glucides fermentescibles.
Le phosphate tamponne le milieu.
Note :
L'éclat métallique distinctif produit par E. coli sur ce milieu est dû à la production d'acide entraînant une liaison amide entre l'éosine et le bleu de méthylène, les autres coliformes ne produisant pas suffisamment d'acide pour provoquer cette réaction.
Klebsiella sur gélose EMB
Ⅳ. Résultats
◈ Après 24 heures à 37°C en aérobiose, en général :
| Organismes | Croissance |
|---|---|
| E. coli | Colonies bleu-noir avec reflet métallique vert |
| Klebsiella | Colonies roses et mucoïdes |
| Enterobacter aerogenes | Bonne croissance; rose, sans éclat |
| Proteus | Taille variable, de couleur bleu-vert à bleue ou saumon, la plupart des souches étant de couleur noire au centre ou sur toute leur surface |
| Salmonella | Colonies incolores |
| Shigella | Colonies incolores |
| Pseudomonas | Colonies incolores |
| Bactéries Gram positives | Inhibition (partielle à complète) |