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bouillon LB | Principe | Préparation | Variants
◉ Généralités
Le bouillon LB , également connu sous le nom de milieu LB, bouillon de lysogénie, bouillon Luria ou milieu Luria-Bertani, est un milieu riche en nutriments couramment utilisé pour la culture de bactéries.
Le milieu LB convient à la culture non sélective de souches d'E. coli pour le clonage, la production de plasmide d'ADN et la production de protéines recombinantes. Convient également à la culture sélective lorsque des antibiotiques appropriés sont ajoutés.
La formule du milieu LB a été publiée en 1951 dans le premier article de Bertani sur la lysogénie, maintenant il existe trois formulations courantes de LB : LB Miller, LB Lennox et LB Luria.
Bouillon LB
◉ Préparation / Composition
La formulation LB Miller est la formulation courante ou plus standard de LB. Les formulations alternatives de LB varient, principalement, dans la concentration de NaCl permettant ainsi de sélectionner les conditions osmotiques appropriées et les conditions de culture souhaitées.
Le milieu LB est disponible sous forme de poudre, bouillon ou s/f prêt à l'emploi.
Composition gélose LB Lennox |
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|---|---|---|---|
| Ingrédients | gramme/litre | ||
| Peptone | 10g | ||
| Extrait de levure | 5g | ||
| Chlorure de sodium | 5g | ||
Composition LB Miller |
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|---|---|---|---|
| Ingrédients | gramme/litre | ||
| Peptone | 10g | ||
| Extrait de levure | 5g | ||
| Chlorure de sodium | 10g | ||
Composition LB Luria |
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|---|---|---|---|
| Ingrédients | gramme/litre | ||
| Peptone | 10g | ||
| Extrait de levure | 5g | ||
| Chlorure de sodium | 0.5g | ||
Composition gélose LB Miller |
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|---|---|---|---|
| Ingrédients | gramme/litre | ||
| Peptone | 10g | ||
| Extrait de levure | 5g | ||
| Chlorure de sodium | 5g | ||
| Gélose | 12g | ||
◉ Variants et utilisations
Il existe une gamme de variants et d'additifs qui peuvent être ajoutés au milieu LB pour l'identification ou la sélection d'une population d'organismes.
- Souvent, un antibiotique est ajouté au milieu stérilisé pour sélectionner les cellules contenant un élément génétique spécifique tel qu'un plasmide, un transposon ou une perturbation génique via une cassette de résistance aux antibiotiques.
- Les formulations à faible teneur en sel, Lennox et Luria, sont idéales pour les cultures nécessitant des antibiotiques sensibles au sel tels que Zeocin.
- Pour isoler des microbes marins tels que Vibrio spp., certains chercheurs ont utilisé 30 grammes par litre de NaCl
- Pour maximiser la croissance, en particulier lorsqu'une source de carbone telle que le glucose est ajoutée, un tampon phosphate ou un tampon Tris-HCl peut être ajouté pour maintenir le pH.
- Si le milieu doit être utilisé pour la croissance des bactériophages, une solution mère stérile de CaCl2 est souvent ajoutée après autoclavage.