Coloration au bleu de Méthylène

Ⅰ.Introduction

En 1886, le bleu de méthylène a été utilisé pour la première fois dans le domaine médical. Dr Paul Ehrlich a découvert un phénomène étrange dans une expérience : le bleu de méthylène a coloré les neurones vivants en bleu, et il a le même effet sur le Plasmodium (un parasite qui cause le paludisme) dans le sang humain.

Actuellement, il est largement utilisé dans les indicateurs chimiques, les colorants, les colorants biologiques et les médicaments

La coloration au bleu de méthylène est une coloration rapide, économique et d'usage courant.

Ⅱ. Bleu de méthylène : Propriétés

Le bleu de méthylène, ou chlorure de méthylthioninium est un composé organique, solide cristallisé inodore soluble dans l'eau et, dans une moindre mesure, dans l'éthanol. À l'état pur, il se présente sous la forme d'une poudre vert foncé, on le trouve commercialement également sous forme d'un sel double avec le chlorure de zinc, de couleur brune.

Le bleu de méthylène est un agent d'oxydoréduction (dépend de son état rédox : il est incolore à l'état réduit, mais est bleu à l'état oxydé).

Ⅲ. Préparation

◈ Bleu de méthylène selon Löffler : Bleu de méthylène : 0,30 g + Alcool éthylique 95% : 30,0 ml + Eau distillée 100,0 ml

Ⅳ. Principe

Étant donné que les cellules ont généralement des parois cellulaires chargées négativement, les chromophores des colorants basiques, chargées positivement, ont tendance à coller aux parois cellulaires, ce qui en fait des taches positives.

La coloration au bleu de méthylène est une coloration simple où un seul colorant est utilisé pour souligner des structures particulières dans l'échantillon, la forme (la taille et la disposition des bactéries). Les organismes d'un échantillon seront de la même couleur, même si l'échantillon contient plus d'un type d'organisme.

◈ Dans certains cas, la coloration au bleu de Méthylène donne de meilleurs résultats que la coloration de Gram. Parmi ces cas :

Ⅴ. Comment réaliser la coloration au bleu de méthylene

• Après avoir effectué le frottis bactérien (étalement , fixation)
• Placer la lame sur un support de coloration et l'inonder de bleu de méthylène. Laisser agir pendant 1-3 minutes
• Laver doucement la lame avec de l'eau distillée, égoutter l'excès d'eau, éponger (ne pas frotter) avec du papier absorbant et laisser les lames sécher complètement à l'air.
• Examiner à l'objectif x100 à immersion (avec une goutte d'huile) avec un éclairage important (diaphragme ouvert)

Recherche de leucocytes dans les selles diarrhéiques

Déposer sur une lame microscopique une petite goutte de mucus fécal ou de selle liquide. Ajouter un égal volume de bleu de méthylène (bleu de Loeffler). Mélanger avec une petite baguette de bois.Recouvrir d'une lamelle. Laisser la coloration se faire pendant 2 à 3 minutes. Examiner à l'objectif à sec ( × 40 ou × 60).

Ⅵ. Interpretation

Les structures colorables apparaissent bleues, la coloration permet de détecter la morphologie de ces structures, leur mode de groupement et dans certains cas le type cellulaire