Bouillon de Rothe | Principe | Préparation | Interpretation
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Ⅰ. Généralités
Le bouillon de Rothe est un milieu sélectif utilisé pour la quantification des entérocoques dans l'eau, les aliments et autres matériaux suspectés d'être contaminés par les eaux usées.
La recherche s'effectue en 2 étapes:
- Un test présomptif en bouillon de Rothe
- Transfert des cultures positives sur un milieu de confirmation (Ex : Litsky, bouillon d'azide pourpre de bromocresol, bile Esculin Azide Agar..)
La présence d’entérocoques sert d’indicateur de contamination fécale. Les entérocoques sont de meilleurs indicateurs que les Escherichia coli de la pollution des eaux usées dans les eaux chlorées parce qu’ils ont une plus grande résistance au chlore.
Bouillon de Rothe
Ⅱ. Préparation / Composition
Suspendre les composants, poudre déshydratée, dans l'eau (34.7g dans 1000 ml d'eau purifiée/distillée).
Porter le milieu à ébullition sous
agitation constante. NE PAS SURCHAUFFER.
Répartir dans des tubes à essai et stériliser en autoclave à 121°C pendant 15 minutes.
Composition bouillon de Rothe |
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|---|---|---|---|
| Ingrédients | gramme/litre | ||
| Peptones | 20g | ||
| Glucose | 5g | ||
| Chlorure de sodium | 5g | ||
| Azoture de sodium | 0,2g | ||
| Tampons | 5,4g | ||
◈ Ce produit présente une faible toxicité, il convient de porter des gants, un masque et de se protéger les yeux lors de la manipulation de la poudre.
Ⅲ. Principe du bouillon de Rothe
Un mélange de peptone et de glucose dans le milieu rend le bouillon de dextrose azide très nutritif et le chlorure de sodium maintient l’équilibre osmotique.
La sélectivité contre les organismes Gram-négatifs est assurée par l’azoture de sodium .
Le système tampon phosphate contrôle le pH.
Ⅳ. Utilisation
Inoculer 10 ml de milieu avec 1 ml de l’échantillon à tester. Inoculer 3 autres tubes avec respectivement 0,1 ml, 0,01 ml et 0,001 ml d’échantillon. Incuber tous les tubes à 37°C et examiner la turbidité après 24 et 48 heures.
Note : Lorsque de grands volumes d'échantillons d'eau doivent être examinés, un milieu à double concentration est utilisé. La turbidité dans les tubes indique la présence d'entérocoques, cependant, elle doit être confirmée par l'inoculation dans un bouillon EVA (azide de violet d'éthyle, litsky) et tests biochimiques.
Ⅴ. Lecture / Interpretation
◈ Incuber tous les tubes 24 et 48 heures à 37°C. Une culture positive provoque un trouble dans les tubes. Ceux-ci seront obligatoirement soumis à une confirmation.
| Organismes | Croissance |
|---|---|
| Enterococcus faecalis, Enterococcus hirae | Croissance trouble |
| Escherichia coli | inhibée |
| Staphylococcus aureus | inhibée |
| Pseudomonas aeruginosa | inhibée |
Références:
- W L MALLMANN, E B SELIGMANN Jr - A comparative study of media for the detection of streptococci in water and sewage
- Handbook of Culture Media for Food Microbiology, J.E.L. Corry et al : Hektoen Enteric (HE) agar 2003
- ASM : Hektoen Enteric Agar Protocol
- Color Atlas of Medical Bacteriology
- Merck Microbiology Manual 12th Edition - Azide Dextrose Broth
- Thermo Scientific™ - Bouillon de dextrose azide (déshydraté)
- Indicia - BOUILLON de ROTHE
- Biolab - AZIDE DEXTROSE BROTH, ROTHE
- VWR Chemicals - AZIDE DEXTROSE BROTH
- HiMedia Laboratories - AZIDE DEXTROSE BROTH