L.D.C. - O.D.C. - A.D.H

◉ Introduction

Les tests de lysine décarboxylase (LDC), ornithine décarboxylase (ODC) et arginine dihydrolase (ADH) sont des outils biochimiques essentiels pour différencier les bacilles à Gram négatif, notamment les Enterobacteriaceae, Vibrionaceae et les bactéries aérobies strictes (Pseudomonas, Acinetobacter).

◉ Principe

Les bacilles à gram (-) aéro-anaérobies facultatifs à métabolisme fermentatif (Enterobacteriaceae et Vibrionaceae) fermentent le glucose ce qui entraîne une acidification du milieu et une coloration jaune du milieu en présence de pourpre de bromocrésol (indicateur de pH). A pH acide les décarboxylases et les dihydrolases présentent une activité maximale. Si les bactéries étudiées possèdent la décarboxylase ou la dihydrolase appropriée, l'activité enzymatique sera alors mise en évidence par la formation de métabolites aminés qui alcaliniseront le milieu, et entraîneront un nouveau changement de coloration du milieu en mauve.

Au contraire, les bacilles à gram (-) aérobies stricts à métabolisme oxydatif (Pseudomonas, Alteromonas, Flavobacterium, Xanthomonas, Alcaligenes, Acinetobacter) dégradent les glucides par voie oxydative en ne produisant que peu de catabolites acides : il s'ensuit que la coloration des trois milieux demeure pratiquement inchangée, mauve pâle à violet foncé après 24 à 48 heures d'incubation.

◉ Composition

◉ Ensemencement : "L.D.C. - O.D.C. - A.D.H"

☰ Pour les bacilles à métabolisme fermentatif :

• A partir d'une culture pure et fraîche prélevée sur milieu gélosé nutritif ou trypto-caseine-soja, préparer une suspension en eau physiologique d'une opacité équivalente au standard Mac Farland 0,5.
• Ensemencer chacun des trois tubes avec 2 gouttes de cette suspension. Les tubes sont alors presque pleins : la culture des bactéries s'effectue dans des conditions d'anaérobiose convenable pour la recherche des décarboxylases et il n'est pas nécessaire de recouvrir d'huile la surface du milieu.

☰ Pour les bacilles à métabolisme oxydatif :

• Verser stérilement le contenu de chacun des trois tubes dans trois tubes stériles (170 x 17 mm).
• Ensemencer chacun des milieux avec 5 gouttes d'une suspension préparée comme il est indiqué plus haut.

◉ Incubation

☰ Pour les bacilles à métabolisme fermentatif :

• La lecture est limitée à 4 jours.
• Coloration jaune du milieu (virage acide) : résultat négatif.
• Coloration violette du milieu (virage alcalin) : résultat positif.

+ : positif en 1 ou 2 jours, [+] : généralement positif en 1 ou 2 jours, (+): positif en 3 ou 4 jours. - : négatif, [-] : généralement négatif, d : résultats variables selon les souches.

☰ Pour les bacilles à métabolisme oxydatif :

• Il est possible de mettre en évidence une décarboxylase ou une dihydrolase chez ces bacilles en versant goutte à goutte une solution de tampon pH 4 dans chacun des trois tubes de milieu. Agiter quelques secondes après l'addition de chaque goutte. Chaque tube reçoit le même nombre de gouttes de tampon pH 4 jusqu'à ce que l'un des trois tubes se colore en jaune.
• Ajouter alors dans les tubes restés alcalins (coloration mauve) trois gouttes supplémentaires de tampon pH 4. Agiter. L'absence de virage acide correspond à la présence d'une décarboxylase ou d'une dihydrolase