Sommaire :
◉ Définition
ELISA (Enzyme-Linked Immuno Assay) ou technique de dosage d’immunoabsorption par enzyme liée est une technique principalement utilisée afin de détecter et/ou de doser la présence d’anticorps ou d’antigènes, dans un échantillon.
Il existe plusieurs types de tests ELISA mais le plus utilisé (celui qui sera détaillé) est le test ELISA indirecte.
◉ Une base à comprendre
Avant de parler de principe, il faut différencier entre une technique dite directe ou indirecte dans les techniques immunologiques :
- Une technique directe : l'élément à rechercher est l'agent responsable (bactérie ou virus) lui-même ou l'un de ses composants (recherche de l'agent causal).
- Une technique indirecte : on recherche les éléments élaborés par l’organisme contre l’agent causal (les anticorps).
◉ Principe d'ELISA indirecte
Le principe de l’ELISA indirecte consiste à détecter la présence d’un anticorps spécifique dans un échantillon (exemple : pour determiner le statut immunologique d'un patient vis à vis du VIH, on cherche les AC anti HIV : s’il est infecté par le virus le système immunitaire va produire des anticorps qu’on peut détectés par ELISA)
◉ Les étapes d'ELISA indirecte
- Fixation de l’antigène : L’antigène connu, spécifique à l’anticorps recherché, est incubé sur une plaque de microtitration (de manière électrostatique au fond des puits)
- Fixation de l’anticorps à doser : On ajoute notre échantillon (sérum contenant l’anticorps), les anticorps spécifiques vont se fixer sur les antigènes. On incube puis on lavage les puits (nécessaire pour enlever les anticorps non fixés).
- Fixation de l’anticorps de détection : On ajoute ensuite un anticorps secondaire anti Ig humaines couplé à une peroxydase. C’est un anti IgG qui va donc reconnaître l’anticorps primaire. On incube puis on lave les puits (nécessaire pour enlever les anticorps secondaires non fixés.)
- Révélation : On ajoute un substrat spécifique à l’enzyme qui, si la réaction est positive (présence de l’anticorps recherché), va être transformé et induit une coloration bleue.
- L'arrêt de la réaction : Se fait par dénaturation de l'enzyme fixée (stoping solution), Puis, la lecture de la DO se fait à une longueur d'onde déterminée à l'aide d'un spectrophotomètre.
**** Peroxydase : La peroxydase est une enzyme de type oxydase, permettant la dégradation des peroxydes. ****
