Contenu :
Ⅰ. Introduction
La gélose Cled (Cystine Lactose Electrolyte Deficient ) est un milieu de culture différentielle, non inhibiteur, utilisée pour l’isolement, la numération et la différenciation des micro-organismes urinaires. Il favorise la croissance des agents pathogènes urinaires, mais empêche l'essaimage excessif des espèces de Proteus en raison de son manque d'électrolytes.
Le milieu permet une détermination quantitative des pathogènes urinaires dont Proteus lorsque des anses calibrées sont utilisées pour l'inoculation.
Ⅱ. Préparation / Composition
Suspendre les composants, poudre déshydratée, dans l'eau (36.13 grammes dans 1000 ml d'eau purifiée/distillée). Le milieu est bouilli pendant quelques secondes jusqu'à dissolution complète des ingrédients. Mélangez correctement et enfin stérilisez par autoclavage à 121 ° C pendant 15 minutes.
Refroidir à 50-55°C et répartir de manière aseptique dans des boîtes de Pétri stériles. Datez le milieu et attribuez-lui un numéro de lot.
Composition gélose Cled | |||
|---|---|---|---|
| Ingrédients | gramme/litre | Ingrédients | gramme/litre |
| Peptone équilibrée | 4.0 g | Tryptone | 4.0 g |
| Extrait de boeuf | 3.0 g | Lactose | 10.0 g |
| L-Cystine | 0.128 g | Bleu de bromothymol | 0.02 g |
| Agar | 15.0 g | pH | 7.3 +/- 0.2 |
Gélose Cled
Ⅲ. Gélose Cled: Principe
◈ Initialement décrit par G.H. Sandys en 1960, le milieu contient de la cystine, du lactose, du bleu de bromothymol et est déficient en électrolytes.
- La cystine est ajoutée au profit des organismes qui ont un besoin spécifique en cystine. Elle favorise la croissance des coliformes.
- Le lactose est inclus pour fournir une source d'énergie aux organismes capables de l'utiliser par un mécanisme de fermentation.
- Le bleu de bromothymol est l'indicateur utilisé dans la gélose, il vire au jaune en cas de production d'acide lors de la fermentation du lactose ou vire au bleu foncé en cas d'alcalinisation. Les bactéries lactose-positives forment des colonies jaunes. Les bactéries qui décarboxylent la L-cystine provoquent une réaction alcaline et forment des colonies bleu foncé
- La déficience en électrolytes réduit l’envahissement du milieu par les Proteus.
Ⅲ. Gélose Cled: Interprétation
| Organismes | Croissance |
|---|---|
| Escherichia coli, Citrobacte | Colonies jaunes d'or, opaques, entourées d'un halo jaune |
| Enterobacter, Klebsiella | Colonies jaunes à bleu blanchâtre, souvent mucoïdes ; milieu jaunâtre |
| Proteus, Serratia | Colonies transparentes, translucides, entourées d'un halo bleu |
| Pseudomonas | Colonies vertes avec une surface mate typique et une périphérie rugueuse |
| Streptocoques | Petites colonies opaques, jaune pâle |
| Staphylocoques | Très petites colonies opaques, jaunes |
| Entérocoques | Petites colonies jaunes d'environ 0,5 mm de diamètre |
